[发明专利]一种分泌辣椒碱单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种分泌辣椒碱单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.14689，是将BALB/c小鼠用完全弗氏佐剂进行首次免疫，不完全弗氏佐剂进行4次加强免疫，不含佐剂的辣椒碱完全抗原进行1次冲击免疫，使得BALB/c小鼠获得免疫；将高效价低IC₅₀的获得免疫的小鼠脾细胞通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到的细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对辣椒碱具有较好的特异性和检测灵敏度(IC₅₀值为8.6ng/mL)，可以用于食品中辣椒碱的残留检测。

技术领域

本发明涉及一种分泌辣椒碱单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

地沟油通常可分为以下几类：一是狭义的地沟油，即将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜(通称泔水)经过简单加工、提炼出的油；二是劣质猪肉、猪内脏、猪皮加工以及提炼后产出的油；三是用于油炸食品的油使用次数超过规定要求后，再被重复使用或往其中添加一些新油后重新使用的油。

我国现行的食品卫生标准中规定了油脂产品中各项卫生指标的限量要求，任何一项卫生指标超过限量要求均被视为可能对人体健康造成危害的产品，不能食用。地沟油中各项卫生指标严重超过标准中的限量要求，并且含有多种有害物质，长期食用这些不合格的油脂产品会对人体健康造成严重的危害。例如：

(1)折叠酸价和过氧化值超标：酸败油脂中所含的大量过氧化脂质进入人体后，极易袭击细胞膜和酶，使血清抗蛋白酶失去活性，损伤基因导致细胞变异的出现和蓄积。诱发癌症、动脉粥样硬化、细胞的衰老等疾病；(2)折叠溶剂残留超标：地沟油中含有的烷烃、环烷烃、烯烃和芳香烃等化合物以及许多不知名的化学物质和有机溶剂，能对人体的中枢神经有较强的刺激和麻痹作用；(3)折叠重金属污染物含量超标：地沟油中的重金属进入人体后可能引起头痛、头晕、失眠、多梦、乏力、消化不良、消瘦、肝区不适、腹绞痛、贫血等症状。严重的会导致重金属中毒；(4)折叠苯并芘超标：地沟油中的苯并芘具有强致癌作用、致畸胎形成作用；等等。

目前，卫生部公开的地沟油监测方法为：1、凝固点检测法；2、透明度检测法；3、粘度检测法；4、折射力检测法；5、光谱测性检测法。但这些方法或不能具体判断地沟油掺杂含量，或需要昂贵的仪器、专业的操作人员，且样品前处理复杂，成本高，时间长，不能实现大量样品的快速检测。

而辣椒碱对地沟油“忠贞不渝”，水洗、土吸、真空、高温都无法让他们分离。因此，通过检测辣椒碱的含量来判断地沟油的含量是一种直观简便的有效方法，建立快速简便的辣椒碱检测方法具有重要意义。

辣椒碱的传统检测方法有气质联用法、毛细管电泳法、高效液相色谱法和毛细管电泳质谱联用法等，然而，这些方法的前处理比较复杂、费时，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对辣椒碱的高效、快速的检测方法。

酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，然而，使用酶联免疫法检测辣椒碱的前提是得到对辣椒碱具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对辣椒碱具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明人尝试通过杂交瘤细胞制备辣椒碱单克隆抗体，但在制备能分泌辣椒碱单克隆抗体的杂交瘤细胞株的过程中，如何制备辣椒碱半抗原和辣椒碱完全抗原、如何使小鼠产生强免疫，还需进一步的研究；制备出的杂交瘤细胞株是否能分泌出辣椒碱单克隆抗体，还需要进一步验证；分泌出的辣椒碱单克隆抗体特异性、灵敏度如何，也需要进一步验证。

发明内容