[发明专利]一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法

权利要求书

1.一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，所述治疗类风湿性关节炎的中药组合物由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子组成，其特征在于，该检测方法以金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ作为昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子的检测指标；

检测步骤如下：

S1混合对照品溶液的制备：精密称定金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ对照品，80%甲醇溶液溶解定容、摇匀，得含有96.8µg/mL金丝桃苷、119.04µg/mL朝藿定B、213.2µg/mL朝藿定A、257.32µg/mL朝藿定C、390µg/mL淫羊藿苷、4.136µg/mL木犀草素、42.24µg/mL槲皮素、16.69µg/mL川陈皮素、24.416µg/mL山奈酚和17.984µg/mL宝藿苷Ⅰ的混合对照品溶液；

S2样品的制备：精密称量治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末，置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液20mL，所述治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末与乙醇溶液物液比为1g:（66-68）mL，称定重量，超声20-40min，超声功率240-260W，室温冷却，称定重量，乙醇溶液补足减轻的重量，摇匀，转速为10000r/min离心10min，取上清液用0.22µm微孔滤膜过滤，即得待测样品；

S3色谱条件：高效液相检测法，流动相A相为乙腈，B相为0.2%磷酸溶液，流速1.0mL/min，柱温30℃，取步骤S1中混合对照品溶液和S2中待测样品，进样，梯度洗脱，洗脱时间和条件如下：

方法中，以金丝桃苷为内参物，分别计算朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚、宝藿苷Ⅰ的相对校正因子ƒ，ƒ的计算公式如下：

ƒ_s/i = ƒ_s/ƒ_i = (A_s×C_i) / (A_i×C_s)

式中As为内参物对照品S的峰面积，Cs为内参物对照品S的浓度，Ai为某待测成分对照品i的峰面积，Ci为某待测成分对照品i的浓度，按照外标法测定内参物峰面积As，利用各成分的ƒ和内参物的实测值，计算待测样品成分的含量；

基于以上步骤确立了9种有效成分相对于金丝桃苷的相对校正因子（fs/i），分别为f_{金丝桃苷/朝霍定}A=2.170、f_{金丝桃苷/朝霍定C}=1.217、f_{金丝桃苷/朝霍定B}=0.753、f_{金丝桃苷/淫羊藿苷}=0.999、f_{金丝桃苷/木犀草素}=0.618、f_{金丝桃苷/槲皮素}=0.567、f_{金丝桃苷/川陈皮素}=0.491、f_{金丝桃苷/山奈酚}=0.537和f_{金丝桃苷/宝霍苷I}=0.675；

所述步骤S3中色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料孔径5µm。

2.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中超声时间为30min。

3.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的乙醇溶液为80%乙醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，其特征在于，所述步骤S3的高效液相检测法的检测器为多波长选择的安捷伦二极管阵列检测器。

5.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ检测波长为270nm，川陈皮素检测波长为325nm，金丝桃苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚检测波长为360nm。