[发明专利]一种检测人MDR1基因多态性的组合物、试剂盒、样品处理方法和应用在审

专利信息
申请号: 201811271585.5 申请日: 2018-10-29
公开(公告)号: CN109295192A 公开(公告)日: 2019-02-01
发明(设计)人: 罗哲容;文荻琛;覃武明;李仁君 申请(专利权)人: 湖南健基生物技术有限公司
主分类号: C12Q1/6876 分类号: C12Q1/6876;C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司: 北京风雅颂专利代理有限公司 11403 代理人: 曾志鹏
地址: 410005 湖南省长沙市开福区*** 国省代码: 湖南;43
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摘要:
搜索关键词: 引物 位点多态性 样品处理 多态性 试剂盒 种检测 灵敏度 应用 检测
【说明书】:

发明涉及到一种检测人MDR1基因多态性的组合物、试剂盒、样品处理方法和应用,所述组合物包括检测人MDR1基因1236位点多态性的引物包括序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物;所述人MDR1基因2677位点多态性的引物包括序列如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物;所述人MDR1基因3435位点多态性的引物包括序列如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的引物,本发明的各引物相互之间不干扰,特异性高,灵敏度、重复性好。

技术领域

本发明属于生物医学领域临床检测技术中的核酸检测技术领域,具体是涉及到一种检测人MDR1基因多态性的组合物、试剂盒、样品处理方法和应用。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)技术是当前核酸检测中最常用技术之一,其中采用荧光标记的taqman探针法的实时荧光PCR技术在核酸检测、临床诊断及分子生物学研究等方面的应用已经非常成熟,该技术已经应用到实验室研究、食品安全、医药卫生等众多行业中,但是这些技术大多采用单个反应管检测单一靶核苷酸,当在单个反应管检测多个靶核苷酸时,由于要同时引入检测不同靶核苷酸的引物和探针序列,这些引入的引物和探针会因为互相之间存在杂交而产生干扰,同时因为涉及到位于人类MDR1基因同一个基因上的三个位点(1236位点、2677位点、3435位点),非常困难找到既能区别野生型和突变型,且又能在单管中不会互相干扰的引物探针设计。同时,作为一个试剂盒,需要规避假阴性就需要加入内对照靶核酸序列以及能检测内对照靶核酸序列的引物探针,加剧了单管多重PCR技术的困难。

目前,基因分型的方法主要有测序法、聚合酶链反应-限制性长度多态性技术、芯片法、以及荧光定量PCR法等。这些技术都必须经过繁琐的核酸提取、纯化过程来获得较高纯度的模板DNA。增加操作的步骤,费时费力,且增加人为操作误差导致的假阳性率和假阴性率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测人MDR1基因多态性的组合物、试剂盒、样品处理方法和应用,各引物相互之间不干扰,特异性高,灵敏度、重复性好。

本发明的内容包括一种检测人MDR1基因多态性的组合物,所述组合物包括用于检测人MDR1基因1236位点、2677位点、3435位点多态性的引物,

所述检测人MDR1基因1236位点多态性的引物包括序列如SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示的引物;所述人MDR1基因2677位点多态性的引物包括序列如SEQID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物;所述人MDR1基因3435位点多态性的引物包括序列如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的引物。

还包括检测人MDR1基因1236位点多态性的探针,序列为SEQ ID NO.1,检测人MDR1基因2677位点多态性的探针,序列为SEQ ID NO.5,检测人MDR1基因3435位点多态性的探针,序列为SEQ ID NO.9。

所述组合物还包括用于检测MDR1基因1236位点、2677位点、3435位点多态性的内标引物及内标探针,所述内标引物序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示,所述内标探针序列如SEQ ID NO.15所示。

本发明还提供一种试剂盒,所述试剂盒含有PCR检测试剂A和PCR检测试剂B,

所述PCR检测试剂A包含序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ IDNO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.5、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.13的多种引物和探针;

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