[发明专利]一种乳酸乳球菌MG1363的构建及其在治疗产妇乳头皲裂中的应用

说明书

一种乳酸乳球菌MG1363的构建及其在治疗产妇乳头皲裂中的应用。首先通过化学合成人源及鼠源趋化因子CXCL12，又称基质细胞衍生因子‑1(SDF‑1)，属于CXC类趋化因子家族的小分子蛋白。再加入乳酸乳球菌特有的分泌表达穿膜肽SPusp45,构建成pMG36e‑CXCL12重组质粒，之后电转进入乳酸乳球菌MG1363，实现趋化因子CXCL12的分泌表达。通过外用乳头创面涂抹方式进行给药，一方面菌液直接分泌表达趋化因子CXCL12可实现乳头创面快速修复；另一方面，婴儿或新生儿通过直接吸吮的哺乳方式可获得益生菌补给，帮助婴儿或新生儿平衡肠道菌群提高自身免疫力。

技术领域

本发明涉及一种分泌表达趋化因子CXCL12的乳酸乳球菌MG1363的制备方法及其在产妇乳头皲裂中的应用，属于生物制药领域。

背景技术

母乳是婴儿最理想的天然食物，母乳喂养对婴儿和产妇近期和远期均有益处。但目前全世界出生后前6个月的纯母乳喂养率仅37％，影响早期纯母乳喂养率的因素很多，其中最常见的主诉就是乳头疼痛、皲裂。乳头皲裂疼痛是产妇早期放弃纯母乳喂养的主要影响因素之一，也是导致早期断奶的主要原因之一。

乳头皲裂是哺乳期常见病之一，其高发时段为分娩后24-72小时，轻者仅乳头表面出现裂口，甚者局部渗液渗血，日久不愈反复发作易形成小溃疡，处理不当又极易引起乳痈。经过长期研究探索，临床上出现了多种的防治乳头皲裂的方法，其中效果较显著的是羊毛脂以及母乳。采用母乳预防和治疗乳头皲裂，虽然此方法方便经济，但并非所有的产妇分娩后都能立即泌乳；高纯度无水羊毛脂无刺激性、低过敏性、无嗅无味且比母乳更为有效，但市售羊脂膏每10克约100-200元人民币不等，这难以满足收入水平较低产妇的迫切需要。

组织和器官的损伤与修复是一个动态复杂的过程，是在多种细胞因子和修复细胞间相互作用下的组织修复过程。趋化因子是细胞因子的重要组成部分，它们是一类结构上相似、对白细胞和干细胞具有定向趋化募集作用的细胞因子，其在创伤愈合中的地位十分重要，它们不仅能趋化白细胞以及修复细胞募集到创面，而且还能激活这些细胞，并增强它们的功能。趋化因子CXCL12，又称基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)是对人类CD34⁺祖细胞有显著趋化作用的CXC类趋化因子，能够通过动员并趋化炎症细胞和各类骨髓来源细胞迁移至损伤部位，参与局部炎症反应和组织修复。

基于趋化因子CXCL12和其受体CXCR4广泛表达于多种组织细胞，且对一些组织器官发育和损伤后修复再生起重要调节作用的功能，使CXCL12治疗产妇乳头皲裂创伤成为可能。但CXCL12在人体血液中极易被二肽氨肽酶IV(DPP IV)降解，且在严重组织损伤修复时产生的内源性CXCLl2水平不能满足组织修复的需要，因此有必要引入外源性CXCLl2。

本发明构建了pMG36e-CXCL12重组表达载体，采用乳酸乳球菌MG1363作为表达菌株。乳酸乳球菌属于公认的益生菌，对人体有良好的益生作用，婴儿通过吮吸母乳可见接获得益生菌补给，帮助构建其肠道菌群稳态提高免疫力；同时乳酸菌具有良好的耐酸、产酸特性，当创面施用重组菌株后可维持其表面保持酸性环境，这对减少细菌滋生以及提高CXCL12生物利用度(酸性内环境均可抑制DPP IV的生物活性)大有裨益。综上所述创面施用可表达CXCL12工程菌株或许可达到治疗产妇乳头皲裂功效。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种分泌表达趋化因子CXCL12的乳酸乳球菌MG1363的制备方法及其在治疗产妇乳头皲裂中的应用，建立了一种CXCL12乳酸乳球菌表达系统，通过乳酸乳球菌在创伤表面持续分泌表达CXCL12，参与局部炎症反应和组织修复，从而实现对产妇乳头皲裂的治疗作用；

本发明是通过以下技术步骤实现的：

一种分泌表达趋化因子CXCL12的乳酸乳球菌MG1363的构建,由以下步骤组成：