[发明专利]一株抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测技术领域。一株抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0711，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14689。抗地克珠利特异性单克隆抗体，其由所述保藏编号为CGMCC No.14689抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0711分泌产生。其应用于食品安全检测中地克珠利残留的分析检测。本发明获得的抗地克珠利单克隆抗体细胞株，对地克珠利有较好的检测灵敏度和亲和力，本发明单克隆抗体的IC₅₀＝0.49 ng/mL，检测线性范围为0.16‑1.55 ng/mL，最低检测限值（LOD）为0.08 ng/mL。

技术领域

本发明涉及一株抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测技术领域。

背景技术

地克珠利（Diclazuril）是一种聚醚类药物，同时也是理想的抗球虫药物，具备高效低毒特点。地克珠利于1986年由比利时Janssen 公司研究开发，以杀菌灵在英国，德国等四十三个国家上市。地克珠利属于三嗪类广谱抗球虫药，可以有效预防和杀灭包括球虫在内的多种原虫。其中对柔嫩、堆型、布氏、巨型、和缓等6种最主要的艾美尔球虫的抗球虫指数均超过180，属于高效抗球虫药物，广泛用于鸡球虫病。

目前地克珠利检测多采用高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱与质谱联用法（LC-MS）、气质联用法（GC-MS）等。上述检测方法可进行定量分析并具有较低的检测限，但是通常需要昂贵的仪器和复杂的操作，前处理及检测时间长，严重制约了这些检测方法的推广，无法达到现场大批量快速检测的要求。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员相对要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一株抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，为间接竞争 ELISA 试剂盒以及胶体金试纸条的研发推广奠定基础。

本发明的技术方案，一株抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0711，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.14689，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期为2017年9月5日。

在本发明的一种实施方式中，抗地克珠利特异性单克隆抗体，其由所述保藏编号为CGMCC No.14689，抗地克珠利特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0711分泌产生。

在本发明的一种实施方式中，所述抗地克珠利特异性单克隆抗体的应用，将其应用于食品安全检测中地克珠利残留的分析检测。

在本发明的一种实施方式中，一种试剂盒，其含有所述的杂交瘤细胞株SS0711或者所述的抗地克珠利特异性单克隆抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述试剂盒，所述试剂盒用于检测地克珠利。

本发明提供的细胞株的制备基本步骤为：

（1）免疫原的制备与鉴定：以带有羧基的地克珠利衍生物为起始反应物，通过碳化二亚胺法与蛋白载体相连，之后通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原，完全抗原通过紫外吸收扫描方法鉴定；

（2）小鼠的免疫：将免疫原与福氏佐剂乳化完全后，通过皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫采用福氏完全佐剂，加强免疫使用福氏不完全佐剂，冲刺免疫时免疫剂量为前一次免疫剂量的一半，与生理盐水混合均匀后直接进行腹腔注射；各次免疫间隔为三周。第三次免疫后，间隔一周采血检测血清效价和抑制；

（3）细胞融合与细胞株建立：通过聚乙二醇法使小鼠脾细胞和小鼠骨髓细胞融合，培养检测阳性细胞孔，并测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行三次亚克隆，最终筛选获得杂交瘤细胞株；