[发明专利]一种鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

a、从易感染沙门氏菌的养鸭场内选取感染沙门氏菌的病变鸭子，分离出原始菌株；

b、分别经紫外、亚硝基胍诱变原始菌株，获得各自最佳诱变条件，最佳诱变条件下细菌死亡率为80～90%左右，然后以各自最佳诱变条件进行紫外—亚硝基胍复合诱变，得到减弱的诱变菌株；

c、将减弱的诱变菌株扩大培养，制备沙门氏菌减毒疫苗。

2.如权利要求1所述的鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤b具体步骤为，

（1）取感染沙门氏菌的病变鸭子，解剖取病变组织，接种普通LB固体培养基，37℃培养箱中培养18-24h，挑取LB固体培养基长出的圆形边缘整齐,表面光滑,半透明,小凸起的菌落，分别接种于沙门氏菌显色培养基和DHL沙门氏菌鉴定培养基，选择在沙门氏菌显色培养基上显淡紫色、同时在DHL沙门氏菌鉴定培养基上显黑色的菌株，传代纯化后，扩大培养，细菌计数后用生理盐水配制成1×10⁸ - 5×10⁸ CFU/ml的原始菌株菌悬液，保存备用；

（2）最佳诱变条件的筛选，将步骤（1）中得到的1×10⁸ - 5×10⁸ CFU/ml的原始菌株菌悬液经波长为254 nm的紫外线在距离为10-30cm的垂直高度下搅拌照射10-30s后，加入亚硝基胍使其最终浓度达0.5-0.7 mg/ml并于37℃、100 r/min的摇床中作用15-30 min，使原始菌死亡率达80～90%，以此作为最佳诱变条件进行复合诱变，诱变后的诱变菌株保存备用。

3.如权利要求1所述的鸭沙门氏菌减毒疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤c具体步骤为，

（1）将诱变菌株接种LB液体培养基，37℃摇床培养8-12h，细菌计数后，用生理盐水配制成1×10¹⁰ - 5×10¹⁰CFU/ml的减毒毒株菌液，备用；

（2）灭活脱脂乳制备，将脱脂奶粉10-15g加入100ml去离子水中，充分混合，100℃-110℃灭菌15-30min，冷却后备用；

（3）取步骤（1）得到的减毒毒株菌液3-5份，与灭菌脱脂乳5-7份充分混合，分装于灭菌5ml西林瓶中，冻干。