[发明专利]循环肿瘤细胞浓缩分离设备及循环肿瘤细胞的浓缩分离方法

说明书

本发明提供一种循环肿瘤细胞浓缩分离设备，其能够简便且高回收率、以及对肿瘤细胞微创地回收源自血液的样品中的循环肿瘤细胞。一种循环肿瘤细胞浓缩分离设备，其用于对源自血液的样品中存在的循环肿瘤细胞进行浓缩分离，其中，在有底的管状容器中收纳具有触变性的细胞分离剂，所述管状容器的一端封闭，另一端开口，所述细胞分离剂的比重在1.050～1.080的范围内，能够通过离心分离操作对肿瘤细胞和所述肿瘤细胞以外的血液细胞进行分离。

本申请是中国专利申请号为201480053961.7、申请日为2014年9月30日、发明名称为“循环肿瘤细胞浓缩分离设备及循环肿瘤细胞的浓缩分离方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种用于从源自血液的样品中对肿瘤细胞进行浓缩分离的循环肿瘤细胞浓缩分离设备。更详细而言，本发明涉及一种能够利用比重差在离心分离后于肿瘤细胞和其它的血液细胞之间由细胞分离剂形成隔壁的循环肿瘤细胞浓缩分离设备及分离方法。

背景技术

所谓循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells：CTC)是从原发性肿瘤组织或转移性肿瘤组织中游离，并浸润到血中，由此分布在外周血中的癌细胞。这样的循环肿瘤细胞与癌的转移性密切相关。因此，循环肿瘤细胞的检测及其动态的观察等备受关注。

另一方面，认为循环肿瘤细胞仅以极微量存在于血液中。因此，为了检测循环肿瘤细胞或者观察循环肿瘤细胞的动态，需要将血液中存在的循环肿瘤细胞浓缩分离至可观察的浓度。目前，作为血液样品中的循环肿瘤细胞的浓缩分离方法，提出了各种方法。例如已知为了除去血液细胞即红血球，在血样品整体中添加溶血剂的方法。然而，存在未发生溶血从而残留的红血球较多这样的问题。另外，存在无法除去白血球这样的问题。此外，存在若在源自血液的样品中添加大量的溶血剂则对目标肿瘤细胞的创伤较大这样的问题。

在下述的专利文献1中，公开有一种使磁珠相对于循环肿瘤细胞上所表达的上皮细胞粘附分子(EpCAM)反应，将肿瘤细胞与其它的细胞磁分选，选择性地回收肿瘤细胞的方法。在下述的专利文献2中，公开有一种使用血球分离过滤器根据细胞的大小分选肿瘤细胞的方法。在下述的非专利文献1中，记载有一种使用了比重调整为1.077g/mL的分离剂商品的密度梯度离心法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2012-022002号公报

专利文献2：日本特开2013-042689号公报

非专利文献

非专利文献1：GE Healthcare Bio-Sciences AB“Instructions 71-7167-00 AGFicoll-Paque PLUS”

发明内容

发明所要解决的技术问题

在专利文献1中记载的方法中，只能够检测到源自上皮细胞的肿瘤细胞。因此，存在肿瘤细胞的回收率较低这样的问题。另外，需要磁标记抗体及磁石等，操作方法繁杂。此外，检查需要很长时间。

在专利文献2中记载的方法中，由于存在无法用血液分离过滤器回收的肿瘤细胞，因此，肿瘤细胞的回收率依然较低。此外，有可能无法进行准确的浓缩分离。

在非专利文献1中记载的方法中，在白血球由分离剂的表面扩散至下方的情况下，有时比重局部地减少。因此，以免干扰与分离剂的界面，必须载置血液样品。因此，操作繁杂。另外，肿瘤细胞的回收也需要谨慎的操作。此外，肿瘤细胞层和分离介质的界面不明确。因此，肿瘤细胞的回收率较低。

本发明的目的在于，提供一种能够解除上述的现有技术的缺点，以简便的操作、高回收率，而且，在不提高相对于细胞的创伤性的情况下，对源自血液的样品中的循环肿瘤细胞进行浓缩分离的循环肿瘤细胞浓缩分离设备及循环肿瘤细胞的浓缩分离方法。