[发明专利]一种环(亮氨酰-精氨酰)二肽盐的液相高纯度规模化合成方法

说明书

本发明公开了一种环(亮氨酰‑精氨酰)二肽盐的液相高纯度规模化合成方法，该方法将N‑α保护的亮氨酸与N‑羟基琥珀酰亚胺在N,N’‑二环己基碳二亚胺或N,N’‑二异丙基碳二亚胺作用下反应生成活泼酯，然后与精氨酸(硝基)甲酯在碱性条件下反应生成N‑α‑亮氨酰精氨酸(硝基)甲酯；将N‑α‑亮氨酰精氨酸(硝基)甲酯脱保护合环，并氢化脱除硝基保护后成盐，得到环(亮氨酰‑精氨酰)二肽盐。本发明方法操作简单，条件温和，成本低廉，绿色环保，合成的环(亮氨酰‑精氨酰)二肽盐纯度高，适合规模化生产。

技术领域

本发明属于多肽合成技术领域，具体涉及一种环(亮氨酰-精氨酰)二肽盐的液相高纯度规模化合成方法。

背景技术

环(亮氨酰-精氨酰)二肽[cyclo(Leu-Arg)，简称cLR]是一系列具有显著抗炎、抗癌、抗真菌作用的活性环二肽，其中cyclo(D-Leu-D-Arg)从人体伤口中的无色杆菌首次提取得到，在0.5μg/mL的浓度下创造了对金黄色葡萄球菌目前已知的最高活性记录，且与氨苄西林有协同抗菌作用；cyclo(L-Leu-D-Arg)能诱导乳腺癌细胞株MADAM-B23细胞凋亡和DNA裂解，是首次分离并报道的对医学上重要的抗真菌和癌细胞的潜在药物来源的环二肽；cyclo(L-Leu-L-Arg)可热杀真菌镰刀菌和链霉菌，同样具有抗菌和抗真菌活性。近年来，随着对环(亮氨酰-精氨酰)二肽抗真菌和抗癌活性的不断研究，有望作为新的一类药物投入临床研究。

目前，环(亮氨酰-精氨酰)二肽的合成方法中，由于精氨酸侧链胍基的特殊性化学性质，使得其基本为Pbf、Pmc、Mtr、Mts等磺酰基类似物保护，原料价格昂贵，且脱保护需用到强腐蚀性的三氟乙酸、甲磺酸等，不易规模化，操作安全系数低，环境污染大，成本高昂。因此，开发一种环境压力小、操作安全、液相规模化绿色合成高纯度环(亮氨酰-精氨酰)二肽的方法成为研究重点之一。

发明内容

本发明的目的是克服现有合成技术的不足，提供一种低成本绿色合成高纯度环(亮氨酰-精氨酰)二肽盐的方法。

针对上述目的，本发明所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、以四氢呋喃为溶剂，将Boc-Leu-OH或Fmoc-Leu-OH与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N’-二环己基碳二亚胺或N,N’-二异丙基碳二亚胺作用下，常温搅拌反应8～12小时，过滤，向滤液中加入H-Arg(NO₂)-OMe的盐、碳酸氢钠或碳酸钠、水，在常温下搅拌反应4～6小时，分离纯化，得到Boc-Leu-Arg(NO₂)-OMe或Fmoc-Leu-Arg(NO₂)-OMe。

2、将Boc-Leu-Arg(NO₂)-OMe脱Boc保护基或将Fmoc-Leu-Arg(NO₂)-OMe脱Fmoc保护基后合环，得到cyclo[Leu-Arg(NO₂)]。

3、在钯碳和氢气条件下脱除cyclo[Leu-Arg(NO₂)]中NO₂保护基，并成盐得cyclo(Leu-Arg)二肽盐，即环(亮氨酰-精氨酰)二肽盐。

上述步骤1中，所述Boc-Leu-OH或Fmoc-Leu-OH、N-羟基琥珀酰亚胺、N,N’-二环己基碳酰亚胺或N,N’-二异丙基碳二亚胺、H-Arg(NO₂)-OMe的盐、碳酸氢钠或碳酸钠的摩尔比优选1:1.2～1.6:1.2～1.6:1.05～1.5，其中所述H-Arg(NO₂)-OMe的盐为H-Arg(NO₂)-OMe的盐酸盐、硫酸盐、乙酸盐、磺酸盐中任意一种。