[发明专利]一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法

权利要求书

1.一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状；将糊状的自体纤维组织粉碎并放入10倍体积的超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0.4mg/mL，备用；

步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入离心机中离心，收集上清液，备用；

步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合，之后进行离心，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液；

步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩，之后冷冻干燥即制得所述可溶性胶原蛋白冻干片。

2.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤四包括将粗制自体胶原蛋白原液放入温度为60—80℃的浓缩机中浓缩。

3.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：粗制自体胶原蛋白原液蒸发浓缩后置于冷冻仓内，将冷冻仓内的温度以0.2-0.6℃/min的速度降至-30℃后，接着将冷冻仓内的温度以0.2-0.6℃/min的速度降至-45℃，当冷肼温度达到-45℃后，保持所述冷肼温度3-6h，之后进行至少四次升温干燥。

4.根据权利要求3所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的四次升温干燥包括首先控制干燥仓内真空度为50-200pa，同时以0.6-1.5℃/h的速度升温至-25℃；之后控制干燥仓内真空度为40-150pa，以3-6℃/h的速度升温至-10℃；然后控制干燥仓内真空度为30-120pa，以3-6℃/h的速度升温至10℃；最后控制干燥仓内真空度为30-100pa，以4-8℃/h的速度升温至35℃。

5.根据权利要求3所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：还可进行第五次升温干燥，所述第五次升温干燥包括控制干燥仓内真空度为30-40pa，控制温升速度在5.5-6.5℃/h继续升温至45℃。

6.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得的混合物的浓度为0.4mg/mL。

7.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。

8.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤二包括将上层悬浮液放入转速为3500—5000r/min的离心机中离心，收集上清液，重复上述离心过程3—5次，收集上清液，备用。

9.根据权利要求1所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：所述的步骤三包括将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为3000-1000r/min的离心机中离心5-30min，弃去上清液，沉淀用乙酸溶解，之后重复离心3—5次，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。

10.根据权利要求9所述可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法，其特征在于：沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解。