[发明专利]一种miRNA在制备抑制新生血管生成和抑制VEGF-A因子表达的试剂中的应用

说明书

本发明提供了一种miRNA在制备抑制新生血管生成的试剂中的应用，属于生物医学技术领域，所述miRNA为miR‑204，所述miR‑204的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的miR204能够显著抑制VEGF‑A因子表达，从而抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和成管，抑制新生血管的生成。

技术领域

本发明属于生物医学领域，尤其涉及一种miRNA在制备抑制新生血管生成和抑制VEGF-A因子表达的试剂中的应用。

背景技术

正常角膜的无血管化对于免疫赦免和屈光非常重要，一些病理情况下，如眼外伤、感染、炎症、角膜缘干细胞缺乏等，角膜中各种炎症细胞和免疫细胞浸润、基质水肿、角膜上皮持续缺损，角膜透明性降低，引起角膜新生血管生长，导致视力下降甚至致盲。

经典的血管生成理论认为，损伤或肿瘤肉芽组织的血管是通过下述三种方式生成的：从先前存在的血管中发出新的分支；内皮细胞出芽生长；微血管的套叠式生长。但是，在2009年，Kilarski等提出一种全新的血管生成理论，他们认为新生血管可以不依赖于已经存在的血管的扩展而生成，组织张力能介导血管的生成。

在正常血管发育和病理性血管形成过程中，血管内皮生长因子(VEGF) 家族发挥着必不可少的作用，VEGF是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有增加血管通透性和血管形成等作用，其中VEGF-A是最重要的血管调控因子，在机体中广泛存在，在角膜中，其主要表达于上皮细胞层， VEGF-A通过与其受体VEGFR-1和VEGFR-2结合而促进血管内皮细胞增殖、迁移。

目前尚没有一种有效抑制角膜血管生长的试剂和方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种miRNA在制备抑制新生血管生成和抑制VEGF-A因子表达的试剂中的应用，以及一种非疾病诊断和治疗目的的有效抑制由组织张应力引起的角膜血管生长的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种miRNA在制备抑制新生血管生成的试剂中的应用，所述miRNA 为miR-204，所述miR-204的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，所述miR-204抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和成管。

本发明提供了所述的miRNA在制备抑制VEGF-A因子表达的试剂中的应用。

优选的，所述miR-204抑制由组织张应力诱导的VEGF-A因子的表达。

优选的，所述miR-204包括miR-204agomir；所述miR-204agomir在所述试剂中的浓度为150～250nmol/l。

本发明还提供了一种诱导的VEGF-A因子表达的方法，包括以下步骤：将机械力间歇性作用于角膜上皮细胞，所述机械力作用于角膜上皮细胞的拉伸度为4～6％，所述机械力作用于角膜上皮细胞的频率为0.8～1.2Hz，所述机械力作用于角膜上皮细胞的时间为5.5～6.5h。

优选的，所述机械力作用于角膜上皮细胞的拉伸度为5％，所述机械力作用于角膜上皮细胞的频率为1.9～1.1Hz，所述机械力作用于角膜上皮细胞的时间为5.8～6.3h。

优选的，所述机械力为组织张应力。

本发明的有益效果：本发明提供了miRNA在制备抑制新生血管生成的试剂中的应用，本发明提供的miR204能够显著抑制VEGF-A因子表达，从而抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和成管，抑制新生血管的生成。

本发明还提供了组织张应力诱导的VEGF-A因子表达的方法，利用本发明所述的方法，将组织张应力间歇性作用于角膜上皮细胞，能够引起VEGF-A 因子表达量的显著提高。

附图说明