[发明专利]一株产β-葡萄糖苷酶乳酸菌及其筛选方法和富含活性黄酮苷元酸奶的制备方法

权利要求书

1.一株产β-葡萄糖苷酶乳酸菌，其特征在于：该乳酸菌分类命名为植物乳杆菌植物亚种（Lactobacillus plantarum subsp. plantarum）PDD-1株，于2018 年06月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15953。

2.一种权利要求1所述的产β-葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）乳酸菌的筛选

挑选传统发酵食品泡菜为样品稀释后，涂布于含有溴甲酚紫的MRS固体培养基平板，静置，于37-43℃培养36-48h，挑选出呈黄色的菌落，将筛选得到具有典型乳酸菌特征的单一菌落初步定为乳酸菌，将初步确定的乳酸菌菌落在MRS固体培养基平板上反复划线几次，直至出现单一的形态一致的菌落为纯化后的乳酸菌；

（2）目标菌株的筛选

将步骤（1）筛选的得到的纯化后的乳酸菌涂布于含有七叶苷和柠檬酸铁的MRS固体培养基平板上，静置，于37-43℃条件下培养20-28h，挑选周围出现黑色水解斑的菌落，继续分离纯化至单一菌落，进行革兰氏染色和生理生化特性鉴定，选取革兰氏染色为阳性，过氧化氢酶实验为阴性的单一菌落，即为产β-葡萄糖苷酶乳酸菌，该乳酸菌分类命名为植物乳杆菌植物亚种（Lactobacillus plantarum subsp. plantarum）PDD-1株，于2018 年06月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15953。

3.根据权利要求1所述的一种产β-葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选方法，其特征在于所述的含有溴甲酚紫的MRS固体培养基的配制方法如下：将MRS肉汤52.24g，溴甲酚紫0.04g，琼脂粉10-20g，溶于1L蒸馏水中，于121℃灭菌20min即可；所述的含有七叶苷和柠檬酸铁的MRS固体培养基的配制方法如下：将MRS肉汤52.24g，七叶苷3g，柠檬酸铁0.3g，琼脂粉10-20g，溶于1L蒸馏水中，于121℃灭菌20min即可。

4.一种利用权利要求1所述的产β-葡萄糖苷酶乳酸菌制备富含活性黄酮苷元酸奶的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）菌株的活化：在无菌操作条件下，将德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌、权利要求1所述的植物乳杆菌植物亚种分别接种于MRS液体培养基中，分别在35-38℃的培养箱中培养20-28小时；

（2）乳酸菌发酵剂的制备：将活化后的德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌按质量比1:1的比例混合后得到的混合菌种和植物乳杆菌植物亚种在无菌操作条件下，分别按体积比4-6%的接种量接种于经巴氏杀菌后冷却至37-40℃的纯牛奶中，在34-40℃保温箱中培养3-6h，制成第一发酵剂和第二发酵剂；

（3）大豆异黄酮牛奶液的制备：以pH5-8的纯牛奶体积为基准，按质量比添加大豆异黄酮粉 0.1-0.5%和蔗糖 4-8%，混合均匀，制成大豆异黄酮牛奶液；

（4）接种发酵剂发酵：将大豆异黄酮牛奶液进行杀菌处理后，按质量或体积比添加第一发酵剂5-8%和第二发酵剂3-7%，充分搅拌使其混合均匀后，置于发酵箱内，于温度为27-47℃，发酵处理4-8h得到发酵液；

（5）酸奶的成熟：将步骤（4）得到的发酵液移入4-8℃冰箱或冷藏室内，经6-12h发酵成熟后，制得富含活性黄酮苷元功能因子的风味酸奶制品。

5.根据权利要求4所述的富含活性黄酮苷元酸奶的制备方法，其特征在于：步骤（3）中纯牛奶pH为6。

6.根据权利要求4所述的富含活性黄酮苷元酸奶的制备方法，其特征在于：步骤（4）中发酵温度为42℃，第二发酵剂接种量为5%。