[发明专利]一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用。本发明是在存在芘的环境中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘。本发明发明人发现，柠檬酸钠是铜绿假单胞菌的容易利用碳源，可促进菌体生长，在芘降解前期可迅速形成较大菌体量；当柠檬酸钠被利用后，会使培养基pH上升，可以抵消其它物质分解代谢引起pH下降，从而有利于铜绿假单胞菌的生长和对芘的代谢；且其发酵液对疏水性化合物的乳化效果更好，有利于芘的溶解及被降解。因此，本发明适合在环境中降解芘，修复环境。

技术领域

本发明属于环境生物技术领域，特别涉及一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法及其应用。

背景技术

芘是具有四个苯环的高分子量多环芳烃，具有稳定、难降解、致癌、致畸、致突变等特性，对人类健康和生态环境造成了巨大危害被美国环保局(US EPA)列为优先监测物。多环芳烃的生物降解吸引国内外研究者高度关注，芘通常被作为高分子量多环芳烃降解研究的模式化合物。迄今为止，现已经发现多种微生物能够降解芘，主要包括红球菌属(Rhodococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、分支杆菌属(Mycobacteria)、伯克氏菌属(Burkholderia)、产碱性杆菌属(Alcaligenes)、曲霉属(Aspergillus)、短梗蠕孢属(Trichocladium canadense)、青霉菌属(Penicillium janthinellum)、尖孢镰刀菌属(Fusarium oxysporum)等。但是，由于芘不溶于水，在环境中很难被微生物所利用，导致微生物对芘的降解周期长、降解效率低。

有些研究人员在培养基中添加Triton X-100、Tween 80、Tween 60等表面活性剂，对芘起到增溶作用，以促进微生物对芘的摄取及分解利用。有些研究人员在培养基中添加玉米淀粉、麦麸、葡萄糖等，提高芘降解前期的菌体量，以提高芘降解率。但是，这些方法对芘的降解率仍然不高。

因此，有必要继续寻找促进微生物降解芘的方法。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法。

本发明的另一目的在于提供所述添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，包括如下步骤：在存在芘的环境中加入柠檬酸钠和铜绿假单胞菌，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘。

所述的添加柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘的方法，更优选包括如下步骤：在存在芘的环境中加入柠檬酸钠、铜绿假单胞菌、氮源和无机盐，通过柠檬酸钠促进铜绿假单胞菌降解芘，氮源和无机盐有利于铜绿假单胞菌的生长。

所述的环境包括水体和土壤；优选为水体。

所述的铜绿假单胞菌优选铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PA06，其于2017年3月6日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2017082。

所述的铜绿假单胞菌是处于对数增生长期中后期的铜绿假单胞菌。

所述的处于对数增生长期中后期的铜绿假单胞菌，优选通过如下步骤制备得到：以柠檬酸钠为碳源配制适宜铜绿假单胞菌生长的液体培养基，经除菌后，接种铜绿假单胞菌菌种，振荡培养至菌体处于对数增生长期中后期。

所述的液体培养基的组成优选如下：柠檬酸钠15～20g/L，蛋白胨5～10g/L，KH₂PO₄2～2.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4～0.5g/L；水为溶剂，pH为6.5～7.5。