[发明专利]一种辣椒杂交种纯度的InDel标记及鉴定方法

权利要求书

1.一种辣椒杂交种纯度的InDel标记及鉴定方法，其特征在于，所述方法包括：

以杂交辣椒叶片单株的基因组DNA为模板，加入一对引物，进行PCR扩增，得到扩增产物，其中，所述引物的上游引物的核苷酸序列为5'-TAGTTGCCACTTGGCTCAAA-3'，所述引物的下游引物的核苷酸序列为5'-TTTTCTTCAAATTCCGAACTCC-3'；

将所述扩增产物进行凝胶电泳，EB染色后，置于凝胶成像系统内成像；

根据成像结果统计带型；

根据带型结果计算辣椒杂交种的纯度。

2.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，采用改良热碱法提取杂交辣椒叶片单株的基因组DNA，所述改良热碱法包括：

将所述杂交辣椒子叶剪碎置于离心管中，向离心管中加入NaOH，将离心管在沸水中放置预定时间，向离心管中加HCl中和，将离心管放置于Tris-HCl进行沸水浴，得到所述杂交番茄叶片单株的基因组DNA。

3.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，在以所述杂交辣椒叶片单株的基因组DNA为模板，加入一对引物，进行PCR扩增，得到扩增产物的步骤之前，还包括：

提取所述杂交辣椒叶片基因组DNA；

以所述杂交辣椒叶片基因组DNA中母本材料和父本材料的基因组DNA为模板，采用InDel分子标记进行PCR扩增，筛选出一对可以在亲本材料之间呈现出多态性扩增的引物。

4.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增为多态性扩增。

5.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增中PCR反应体系包括10μL的2×taq mix，0.4μL的所述上游引物，0.4μL的所述下游引物，2μL的所述杂交番茄叶片单株的基因组DNA，加水至20μL。

6.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增中PCR反应过程包括：

依次在94℃温度条件下反应5min，94℃温度条件下反应30s，55℃条件下反应30s，7 2℃条件下反应15s，循环32次；

72℃温度条件下反应10min，最后温度4℃条件下保存。

7.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，所述将扩增产物进行凝胶电泳包括：

将5μL所述扩增产物于1％琼脂糖凝胶上120V恒压电泳20min。

8.根据权利要求1所述的标记及鉴定方法，其特征在于，所述根据带型结果计算辣椒杂交种的纯度的公式为：

辣椒杂交种的纯度(％)＝扩增出两条带的种子数目/待测种子数目*100％。