[发明专利]一种核酸释放剂以及核酸现场释放方法在审
申请号: | 201811286832.9 | 申请日: | 2018-10-31 |
公开(公告)号: | CN109306350A | 公开(公告)日: | 2019-02-05 |
发明(设计)人: | 周冬根;应清界;郭利川;汤赛君;王智宏 | 申请(专利权)人: | 宁波奇天基因科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/6806 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 刘奇 |
地址: | 315000 浙江省宁波市*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 核酸释放 核酸 非离子型表面活性剂 牛血清白蛋白 乙二胺四乙酸 氯化钾 异硫氰酸胍 核酸提取 液体制剂 蛋白酶K 释放 海藻糖 回收 检测 污染 应用 | ||
1.一种核酸释放剂,其特征在于,所述核酸释放剂为液体制剂,所述核酸释放剂中,非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2~2%;海藻糖的质量体积百分含量为0.01~2%;蛋白酶K的质量体积浓度为0.1~5mg/ml;氯化钾的浓度为50~200mmol/L;异硫氰酸胍的浓度为20~100mmol/L;牛血清白蛋白的浓度为0.5~10mmol/L;乙二胺四乙酸的浓度为1~10mmol/L;Tris-HCl的浓度为0.2~5mmol/L;所述核酸释放剂还包括余量的无菌水。
2.根据权利要求1所述的核酸释放剂,其特征在于,所述核酸释放剂中,所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.5~1%;所述海藻糖的质量体积百分含量为0.02~0.5%;所述蛋白酶K的质量体积浓度为0.5~4.5mg/ml;所述氯化钾的浓度为55~100mmol/L;所述异硫氰酸胍的浓度为25~60mmol/L;所述牛血清白蛋白的浓度为1~9mmol/L;所述乙二胺四乙酸的浓度为2~6mmol/L;所述Tris-HCl的浓度为0.3~3mmol/L。
3.根据权利要求1所述的核酸释放剂,其特征在于,所述核酸释放剂中,所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.3~1.5%;所述海藻糖的质量体积百分含量为0.1~1%;所述蛋白酶K的质量体积浓度为0.6~4mg/ml;所述氯化钾的浓度为60~80mmol/L;所述异硫氰酸胍的浓度为40~60mmol/L;所述牛血清白蛋白的浓度为3~10mmol/L;所述乙二胺四乙酸的浓度为2~5mmol/L;所述Tris-HCl的浓度为0.5~4mmol/L。
4.根据权利要求1所述的核酸释放剂,其特征在于,所述核酸释放剂中,所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.5~1.4%;所述海藻糖的质量体积百分含量为0.01~0.3%;所述蛋白酶K的质量体积浓度为1~5mg/ml;所述氯化钾的浓度为100~150mmol/L;所述异硫氰酸胍的浓度为60~100mmol/L;所述牛血清白蛋白的浓度为5~10mmol/L;所述乙二胺四乙酸的浓度为2~6mmol/L;所述Tris-HCl的浓度为0.2~5mmol/L。
5.根据权利要求1~4任意一项所述的核酸释放剂,其特征在于,所述Tris-HCl的pH值为7.2~7.7。
6.根据权利要求1所述的核酸释放剂,其特征在于,所述的非离子型表面活性剂为CA-630类非离子表面活性剂。
7.根据权利要求6所述的核酸释放剂,其特征在于,所述的非离子型表面活性剂为辛基苯基-聚乙烯二醇。
8.利用权利要求1~7任意一项所述核酸释放剂进行核酸现场释放方法,包括以下步骤:
1)将所述核酸释放剂与样本混合获得混合液;
2)将步骤1)所述的混合液静置3~10min后,固液分离,收集固相组分获得目的核酸。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述核酸释放剂与样本的体积比为1:(1~3)。
10.根据权利要求8或9所述的方法,其特征在于,步骤2)所述的固液分离的方法为离心,所述离心的转速为1500~2500rpm,所述离心的时间为5~10s。
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