[发明专利]高毒力株幽门螺杆菌的环介导等温扩增检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种检测高毒力株幽门螺杆菌的LAMP检测用引物，其特征在于，所述LAMP检测引物包括：

F3:5'-GGGAGAAAAATGTTACTCTTCA-3'；

B3:5'-CGAAACTAGTGATAGCGAGAT-3'；

FIP:5'-GAGGCGTTGGTGTATTTGAA-CCTAAAACATGATGGCGTG-3'；

BIP:5'-GAATCCCAATAAGGGTGTAGGCG-GCAAATTAAAGATAGCTACCTTGT-3'；

LB:5'-GGCGTTTCCCATTTAGAAGTAGG-3'。

2.权利要求1所述引物组在基于环介导等温扩增法检测高毒力株幽门螺杆菌中的应用。

3.一种检测高毒力株幽门螺杆菌的LAMP检测方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1所述LAMP检测用引物进行LAMP扩增。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

S1.配置LAMP反应体系，通过LAMP反应程序对反应模板进行扩增；

S2.通过肉眼观察反应管颜色变化判断检测样品中是否含有高毒力株幽门螺杆菌。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，

所述步骤S1中，

LAMP反应体系为：5pM的外引物F3和B3各1μl；40pM的内引物FIP和BIP各1μl；20pM环引物LB1μl；2×反应缓冲液12.5μl；1μl的BstDNA聚合酶；荧光染料1μl；2μl的待测DNA模板，加去离子水至25μl体系；

优选的，所述待测DNA模板包括但不限于从纯培养菌落、胃粘膜组织、胃液、肠液、唾液、牙斑、粪便中获得的DNA样品；

所述DNA样品制备方法为：将待测样品进行沸水浴处理10min，12000rpm×4min离心即得；

LAMP反应条件为：63℃恒温60min。

6.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中，

如肉眼观察反应产物为绿色浑浊液体，则确认含有高毒力株幽门螺杆菌；如反应产物为橙色透明液体，则表明不含有高毒力株幽门螺杆菌。

7.一种高毒力株幽门螺杆菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述引物组、反应缓冲液和BstDNA聚合酶。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液组分如下：

Tris-HCl 0.8μmol；KCl 0.4μmol；MgSO₄ 0.32μmol；(HN4)₂SO₄ 0.4μmol；Tween20 0.04μl；甜菜碱32μmol；4×dNTPs 0.056μmol。

9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光染料。

10.权利要求7-9任一项所述试剂盒在基于环介导等温扩增法检测高毒力株幽门螺杆菌中的应用。