[发明专利]一种同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的试剂盒及多重PCR检测方法在审
申请号: | 201811289704.X | 申请日: | 2018-10-31 |
公开(公告)号: | CN109321675A | 公开(公告)日: | 2019-02-12 |
发明(设计)人: | 李俊周;刘李鑫哲;赵全志;杜彦修;孙红正;彭廷;张静 | 申请(专利权)人: | 河南农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人: | 张兵兵 |
地址: | 450002 河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 同步检测 试剂盒 基因 多重PCR检测 水稻 特异性引物 检测 分子标记辅助育种 农业生物技术 高产品种 目标基因 品种改良 多重PCR 一次PCR 优化 | ||
1.一种同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的试剂盒,其特征在于:包括GW5基因的特异性引物和GW8基因的特异性引物;
所述GW5基因的特异性引物为:
GW5-F:5′-GTCGGTCGTTGGAGGCA-3′,
GW5-R:5′-GGGACTATGTGGGATAGGAT-3′;
所述GW8基因的特异性引物为:
GW8-F:5′-AAAGAGACAGCCACGGAATC-3′,
GW8-R:5′-ATCTTGAGATCCCACTCCAT-3′。
2.根据权利要求1所述的同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的试剂盒,其特征在于:还包括2×Taq Master Mix、DNA Marker。
3.一种同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的多重PCR检测方法,其特征在于:包括以下步骤:以水稻基因组DNA为模板,利用GW5基因的特异性引物和GW8基因的特异性引物进行多重PCR扩增,扩增产物经凝胶电泳分离后,根据特征条带判定结果;
所述GW5基因的特异性引物为:
GW5-F:5′-GTCGGTCGTTGGAGGCA-3′,
GW5-R:5′-GGGACTATGTGGGATAGGAT-3′;
所述GW8基因的特异性引物为:
GW8-F:5′-AAAGAGACAGCCACGGAATC-3′,
GW8-R:5′-ATCTTGAGATCCCACTCCAT-3′。
4.根据权利要求3所述的同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的多重PCR检测方法,其特征在于:所述多重PCR扩增的反应体系为:2×Taq Master Mix 10μL,50ng/μL水稻基因组DNA2μL,10ng/μL GW5基因特异性引物GW5-F、GW5-R各1μL,10ng/μL GW8基因特异性引物GW8-F、GW8-R各1μL,ddH2O 4μL。
5.根据权利要求3所述的同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的多重PCR检测方法,其特征在于:所述多重PCR扩增的反应程序为:95℃预变性5min;95℃变性30s,55℃复性30s,72℃延伸2min,35个循环;最后72℃延伸10min,4℃保存。
6.根据权利要求3所述的同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的多重PCR检测方法,其特征在于:所述凝胶电泳为:6%聚丙烯酰胺凝胶中、50W功率下电泳1h。
7.根据权利要求3所述的同步检测水稻粒宽基因GW5和GW8的多重PCR检测方法,其特征在于:所述根据特征条带判定结果的具体方法为:GW5基因型判定:当扩增出1938bp特征条带时,判定该品种GW5基因为野生型;当扩增出726bp特征条带时,判定该品种GW5基因为缺失型;GW8基因型判定:当扩增出161bp特征条带时,判定该品种GW8基因为野生型;当扩增出151bp特征条带时,判定该品种GW8基因为缺失型;由GW5基因型判定结果和GW8基因型判定结果可以判定稻谷粒宽。
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