[发明专利]硝化菌剂的保存方法

说明书

本发明公开了一种硝化菌的保藏方法。包括(1)收集培养得到的硝化菌菌体；(2)配置pH范围5.5‑7的保藏液，在保藏液添加硝化菌代谢抑制剂；(3)将所述的硝化菌菌体与保藏液在保藏容器中混合，并排除溶液中的溶解氧；(4)将步骤(3)装有混合液的容器置于室温环境保藏或低温冷藏。与现有技术相比，本发明方法适宜大量的硝化菌的长期保藏，具有保存效果好、存活率高、不含有毒有害物质、配方简单，易于推广等优点。

技术领域

本发明涉及一种菌剂保藏方法，具体涉及一种简单有效的硝化菌剂的保存方法。

背景技术

氨氮浓度过高不仅会引起水体富营养化，导致藻类过量繁殖，危害生态，而且氨氮具有一定的生物毒性，破坏水源，威胁人类健康。生物硝化是在有氧条件下，通过微生物作用，将水体中的氨氮不断氧化成亚硝酸盐，继而氧化为硝酸盐，从而降低水中氨氮浓度。

微生物菌种是重要的生物资源之一，具有特殊功能的微生物被分离培育后，需要保持其优良性状不变或尽可能少变化，才能长期应用于环境治理中。微生物保藏的基本原理主要是根据其生化代谢特征，人为创造条件，使微生物代谢处于减缓或休眠状态。好的菌剂保存方法不仅能够保持菌种的优良性状不退化，同时方法本身简便经济，可以在工业上推广使用。

为了能够有效地保藏微生物菌剂，需要针对菌种特性研究适宜的保藏方法。菌种保存有很多方法，低温冷藏甚至冷冻便是一种有效方法，通过降低微生物代谢速度来实现菌剂保藏，虽然使用较为广泛，但是冷藏冷冻需要专门的制冷设备，其电耗成本也较高，对于大量的菌剂保藏仍受一定限制。专利CN105543093A通过将氨氮降解菌置于0～4℃进行保存；专利CN103103143B是将硝化菌置于-20～-70℃进行冷藏保存；专利CN106967634A将序批式反应器中的活性污泥菌群置于2～5℃进行低温保存。除了冷藏冷冻的方法，冷冻或真空干燥也可以进行菌剂的保存。专利CN103880168B就是通过冷冻干燥机进行好氧硝化颗粒污泥的保存。虽然干燥保存效果较好，但是需要特定干燥设备，且效率偏低，难以满足大规模的使用需求。

除了理化方法，还可以通过微生物代谢抑制来延长菌剂的保存时间，但某些抑制剂和防腐剂具有一定的毒性。专利CN105543093A是通过添加亚硝酸盐作为抑制剂用来保存氨氮降解菌，但亚硝酸盐具有一定的致癌性，危害人类健康；专利CN102260630B和CN104357326B是分别通过添加硫酸铜或苯甲酸钠和山梨酸钾用来菌剂保存。这两种化学品属于防腐剂，其本身就会抑制微生物活性，且作用具有广谱性，防腐剂的使用也会影响菌剂的活性。

微生物制剂和化学制剂最大的区别在于其本身为微生物菌体，具有一定的生物活性。对于水处理来讲，微生物制剂的保质期时间以及质保期内的菌体的活性对污染治理效果具有很强的关联性。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明的目的在于提供一种操作方便，无需冷藏，且不含有毒有害物质，适合较大量菌剂保存，菌剂活性保持高，成本低廉的硝化菌剂的保存方法。

为达到上述目的，本发明硝化菌剂的保存方法，包括以下步骤：

(1)收集培养得到的硝化菌菌体；

(2)配置pH范围5.5-7的保藏液，在保藏液添加硝化菌代谢抑制剂；

(3)将所述的硝化菌菌体与保藏液在保藏容器中混合，并排除溶液中的溶解氧；

(4)将步骤(3)装有混合液的容器置于室温环境保藏或低温冷藏。

优选的，所述的保藏液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸-NaOH-盐酸缓冲液或KH₂PO₄-NaOH缓冲液。

优选的，步骤(2)所述的硝化菌抑制剂为可溶性硝酸盐。