[发明专利]基于金属离子配位-分子印迹传感器的凝血酶检测方法

权利要求书

1.一种基于金属离子配位-分子印迹传感器的凝血酶检测方法，其特征在于，所述方法将金属离子配位-分子印迹修饰电极为工作电极，参比电极为Ag/AgCl电极，辅助电极为铂电极，组成三电极体系，实现对凝血酶的高灵敏检测；

所述金属离子配位-分子印迹修饰电极制备方法的具体步骤如下：

(1)以石墨粉为原材料，通过Hummers氧化法制得氧化石墨烯；

(2)将0.1～2.0mg/mL的氧化石墨烯2～20μL滴至干净的玻碳电极表面，室温下自然晾干；然后将此修饰电极置于0.1mol/L KCl溶液中，在-1.8～0.4V范围扫描5～40圈，得到还原石墨烯修饰玻碳电极；

(3)将还原石墨烯修饰玻碳电极置于0.2-1.0mmol/L的HAuCl4溶液中，以扫速20～200mV/s，电位范围为-1.1～0.2V，扫描5-50圈，得到金纳米粒子/还原石墨烯修饰玻碳电极；

(4)取50～100μL浓度为0.05～0.5mg/mL的凝血酶与5～50μL浓度为0.01～0.10mol/L的过渡金属溶液混合，孵育0.5～5小时，得到过渡金属-凝血酶配合物；

(5)金纳米粒子/还原石墨烯修饰玻碳电极置于2～20mmol/L的半胱氨酸溶液中浸泡6～30小时后冲洗干净；然后，将此修饰电极置于(4)的过渡金属-凝血酶配合物中反应2-20小时，取出冲洗并晾干；

(6)将(5)得到的修饰电极置于含有0.1～2.0mmol/L有机染料的磷酸缓冲溶液中，在1.7～1.2V阳极化200～800s，然后在0.2～-0.6V范围内聚合5～50圈；接着将修饰电极在5～50mmol/L乙二胺四乙酸二钠盐中洗脱5～50分钟，然后在0.01～0.1mol/L NaOH中洗脱5～50分钟，制得金属离子配位-分子印迹修饰电极，即为检测凝血酶的传感器。

2.根据权利要求1所述基于金属离子配位-分子印迹传感器对凝血酶检测方法，其特征在于，所述传感器用于检测凝血酶的线性范围为2.0pg/mL～0.50ng/mL，检测限为0.80pg/mL。

3.根据权利要求1所述基于金属离子配位-分子印迹传感器对凝血酶检测方法，其特征在于，所述有机染料为硫堇、耐尔兰或甲苯胺蓝。

4.根据权利要求1所述基于金属离子配位-分子印迹传感器对凝血酶检测方法，其特征在于，所述磷酸缓冲溶液的pH值为5.0～8.0。