[发明专利]胎儿滋养层细胞的标志物、鉴定方法、检测试剂盒和应用

说明书

本发明属于生物细胞鉴定技术领域，具体涉及一种胎儿滋养层细胞的标志物、鉴定方法、检测试剂盒和应用。所述鉴定方法是采用用荧光标记的HK2抗体物质对含有胎儿滋养层细胞的样本进行染色处理，然后进行荧光检测，若HK2阳性的细胞就是目标细胞。所述试剂盒包括荧光标记的HK2抗体物质和细胞核染色剂。本发明提供的技术方案能够在孕早期妇女的宫颈粘液样本或血液样本中，较为灵敏可靠地检测到胎儿滋养层细胞，尤其可用于孕早期产前诊断。

技术领域

本发明属于生物细胞鉴定技术领域，具体涉及一种胎儿滋养层细胞的标志物、鉴定方法、检测试剂盒和应用。

背景技术

目前，染色体异常的遗传性疾病尚无较好的治疗方法。因此，在孕早期通过产前诊断及时发现胎儿遗传信息的异常并积极干预，能够有效的降低出生缺陷率。目前临床中采用的产前诊断方法主要为有创性检查，如绒毛活检、羊水穿刺检查、胎儿脐血检测等，但这类有创性检查有一定的感染、流产风险。另外，对于试管婴儿可以进行植入前的产前诊断，但仅适用于试管婴儿，且对技术要求非常高。目前临床中采用的无创检查包括B超检查和孕妇血清生化检查，但这些方法只是适用范围有限的产前遗传疾病的辅助筛查手段而非产前诊断方法。因此，在孕早期实现无创产前诊断越来越引起人们的重视。

目前已报道的方法主要包括从孕妇外周血中分离胎儿细胞及胎儿游离基因片段进行检测。孕妇外周血中的胎儿细胞包括胎儿有核红细胞、胎儿滋养层细胞等，但是由于孕妇外周血中胎儿细胞数目极少且不稳定，常难以分离到较多数目的胎儿细胞实现可靠检测。而孕妇外周血中的游离基因片段目前已被批准用于部分染色体三倍体的检测(如13、18、21等染色体)，但由于只是基因组的片段信息，无法获得胎儿完整的基因组信息，因此其能够检测的遗传疾病种类非常有限，而且这一方法为筛查方法而非诊断方法。

早在1971年，Shettles等人就发现了孕早期妇女宫颈粘液内存在胎儿滋养层细胞，开启了宫颈内胎儿滋养层细胞用于产前诊断的研究。脱落的滋养层细胞来源于本次妊娠，不受上次妊娠的影响，获得的滋养层细胞含有胎儿的完整基因组信息，可用来检测本次妊娠胎儿的染色体情况。更重要的是，宫颈滋养层细胞的数目较多，且能出现于孕早期，为孕早期的产前诊断奠定了基础。进一步的研究显示滋养层细胞表达人白细胞抗原G(HLA-G)，可用于宫颈粘液中胎儿滋养层细胞的富集与分离。其他研究还报道了另外的用于鉴定胎儿滋养层细胞的标志物，如CK7,β-HCG等。但是，由于在宫颈处采集到的宫颈脱落细胞较为复杂，包括鳞状上皮细胞、宫颈柱状上皮细胞、宫颈腺上皮细胞、成纤维细胞、红细胞、白细胞、淋巴细胞、少量滋养层细胞等复杂的细胞组成，目前现有的标志物及检测方法难以在如此复杂的细胞样本中准确检测到的胎儿滋养层细胞。因此，需要发展更灵敏准确的标志物及相应的检测方法与试剂盒。

发明内容

本发明提供了一种胎儿滋养层细胞标志物、鉴定方法、检测试剂盒和应用，用以解决目前胎儿滋养层细胞鉴定灵敏性差，准确率低的问题。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案提供了HK2在胎儿滋养层细胞鉴定或分离中的应用，所述HK2(己糖激酶2)作为胎儿滋养层细胞的生物标志物。

可选地，所述胎儿滋养层细胞为宫颈粘液中的胎儿滋养层细胞。

我们知道，在人妊娠早期，子宫内的缺氧环境有助于胎盘内的细胞增殖和血管生成，并引起滋养层细胞中糖酵解相关基因的表达。在胚胎发育过程中，绒毛外滋养层细胞脱落至宫颈管，被宫颈粘液包裹，这些滋养层细胞主要以糖酵解方式获取能量。另一方面，我们也知道，在糖酵解过程中，葡萄糖被细胞膜表面的葡萄糖转运体(GLUT)输运进入细胞后，首先在己糖激酶(HK)催化下进行磷酸化。现已发现的人类HK有4种亚型，分别由HK1、HK2、HK3和HK4基因编码生成。HK1广泛表达于几乎所有的哺乳动物组织中，HK2通常表达于胰岛素敏感组织如脂肪、骨骼和心肌中，但在多种肿瘤组织中高表达，通过与线粒体外膜上离子通道相互结合实现糖代谢的调控。HK3则往往低水平表达，HK4的表达则限制于胰腺和肝脏。