[发明专利]一种高比活酸性甘露聚糖酶突变体

说明书

本发明涉及蛋白质工程改造技术领域，具体提供了一种高比活甘露聚糖酶突变体。与野生型相比，本发明提供的甘露聚糖酶突变体的比活力普遍提高了4.4%‑38.97%。本发明所述甘露聚糖酶突变体比活力的提高，有利于降低甘露聚糖酶的生产成本，加快该酶在饲料领域中的广泛应用，市场前景广阔。

技术领域

本发明属于蛋白质工程改造技术领域，具体涉及比活得到提高的酸性甘露聚糖酶突变体。

背景技术

植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素及木质素等物质构成。甘露聚糖是植物半纤维素的重要组分，是由β-1，4-D-甘露糖连接而成的线状多聚体，在多糖的侧链上主要有葡萄糖基、乙酰基和半乳糖基等取代基团。β-甘露聚糖酶(β-mannanase EC3.2.1.78)是一种水解甘露聚糖的内切水解酶，以内切方式降解甘露糖主链β-l,4糖苷键，释放出短的β-l,4甘露寡糖。近年来，随着甘露寡糖生理功能的发现，绿色饲料的兴起以及人们环保意识的增强，能源的再生利用研究，人们对β-甘露聚糖酶的研究和利用已进入了一个新的阶段。β-甘露聚糖酶已被广泛应用于食品、医药、饲料、造纸、纺织印染、石油开采、精细化工及生物技术等诸多领域，是一种新型的工业酶，具有很大的潜在应用价值。β-甘露聚糖酶广泛存在于细菌、放线菌、真菌、植物、动物等生物中。但天然菌株所产的甘露聚糖酶产量低，不能满足工业化生产的需要。酶分子的比活性是衡量酶的性质的重要指标，具有高比活性的甘露聚糖酶在实际应用中具有更广阔的前景。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种甘露聚糖酶突变体。所述突变体蛋白的比活力得到显著提高，将大大降低甘露聚糖酶的生产成本，有利于该酶在饲料领域的广泛应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种甘露聚糖酶突变体，具有(Ⅰ)、(Ⅱ)或（Ⅲ）所示的氨基酸序列中的任意一个：

(Ⅰ) 与甘露聚糖酶的氨基酸序列SEQ ID NO:1具有至少95%同源性的序列；

(Ⅱ) 具有所述甘露聚糖酶的至少一个免疫表位，且所述甘露聚糖酶的氨基酸序列SEQ ID NO:1经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；

（Ⅲ）由如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列或其互补序列或因遗传密码的简并性而与如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列或其互补序列的核苷酸序列不同的序列编码的氨基酸序列。

在本发明的一些实施例中，所述甘露聚糖酶突变体是氨基酸序列SEQ ID NO:1的酶蛋白的第296位氨基酸被取代。

在本发明的一些实施例中，所述甘露聚糖酶突变体是氨基酸序列SEQ ID NO:1的酶蛋白的的第297位氨基酸被取代。

在本发明的一些实施例中，所述甘露聚糖酶突变体是氨基酸序列SEQ ID NO:1的酶蛋白的的第339位氨基酸被取代。

在本发明的一些实施例中，所述甘露聚糖酶突变体是氨基酸序列SEQ ID NO:1的酶蛋白的的第296位，第297位，第339位氨基酸中的任意两个氨基酸同时被取代。

在本发明的一些实施例中，所述甘露聚糖酶突变体是氨基酸序列SEQ ID NO:1的酶蛋白的的第296位，第297位和第339位氨基酸同时被取代。

在优选实施例中，所述甘露聚糖酶突变体的第296位氨基酸由Val突变为Ile。

在优选实施例中，所述甘露聚糖酶突变体的第297位氨基酸由Thr突变为Tyr。

在优选实施例中，所述甘露聚糖酶突变体的第339位氨基酸由Asn突变为Tyr或Phe。