[发明专利]一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法

权利要求书

1.一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：包括以下步骤步骤一：称取干燥粉碎的紫藤花，以乙醇为提取溶剂，混合后置于提取器中提取或浸泡后提取，过滤，滤渣重复上述提取步骤，合并滤液并浓缩，得紫藤花提取物；

步骤二：用高效液相色谱与铁离子还原/抗氧化能力法在线筛选步骤一所得紫藤花提取物中具有抗氧化活性的化合物峰；

步骤三：配制一系列溶剂体系，充分震荡后静置分层，取等体积的上相和下相溶液混合，并加入步骤一所得的紫藤花提取物，充分震荡溶解后静置分层，再分别取上相和下相溶液去除溶剂后得待检测样品，将待测样品基于步骤二的高效液相色谱与铁离子还原/抗氧化能力法分析条件进行检测， 算出抗氧化活性峰在不同溶剂体系中的分配系数，得出高速逆流色谱分离的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水体积比为3-4:5:3-5:5；

步骤四：采用步骤三的溶剂体系，用高速逆流色谱对步骤一制得的紫藤花提取物进行分离，高速逆流色谱的紫外检测器在线监测，收集相应馏分减压干燥，即得提取物中的抗氧化物质5,7,3ˊ,4ˊ-四羟基黄酮。

2.根据权利要求1所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述步骤一中乙醇体积浓度50%-90%，紫藤花与乙醇固液比为1：6-10。

3.根据权利要求1所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述提取器为超声波清洗器，提取条件为在50-60℃条件下提取30-60min，或所述提取器为超声-微波提取器，提取10-30min；所述浸泡提取为常温浸泡1-2天。

4.根据权利要求1所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述步骤一中滤渣重复处理2-4次，合并滤液并于60℃下真空浓缩。

5.根据权利要求1所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述步骤二中高效液相色谱条件：波长为254nm，Megres C18柱，Megres C18柱为4.6mm×250mm，5μm，流动A相：水，流动B相：乙腈；柱温：30℃，流速0.8mL/min，进样量10μL，梯度洗脱条件：0-5min，20%B；5-25min，20%-30% B；25-35min，30%-40% B；35-40min，40% B；40-45min，40%-20% B；45-50min，20% B。

6.根据权利要求1所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述步骤二中经高效液相色谱分离后溶液与铁离子还原/抗氧化能力法溶液在反应管中混合反应，反应结束后，用另一高效液相色谱的紫外检测器在593nm波长检测，得到抗氧化活性的化合物峰。

7.根据权利要求6所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述铁离子还原/抗氧化能力法溶液流速为0.3 mL/min，反应管长为15m。

8.根据权利要求1所述的一种从紫藤花中分离纯化抗氧化物质的方法，其特征在于：所述步骤四中的溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，流动相流速为1-3 mL/min，分离柱转速为700-900rpm。