[发明专利]同时抗CD70和CD47的重链抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种同时抗CD70和CD47的重链抗体，该重链抗体为骆驼源获得，具体制备方法为，利用噬菌体抗体库技术筛选，使用基因工程方法制备所述单克隆抗体或其片段的DNA表达载体，转染宿主细胞获得含有所述单克隆抗体或其片段的细胞培养上清，并经纯化制备得到目的蛋白。本发明所述重链抗体可以应用于制备治疗肿瘤的药物，为进一步的抗体药物研发提供理论基础。

技术领域

本发明属于抗体药物技术，特别是涉及一种同时抗CD70和CD47的重链抗体及其制备方法和应用。

背景技术

CD70是Ⅱ型跨膜糖蛋白，也属TNF家族。hCD70是一个由193个氨基酸组成的三聚体，其中胞膜外的155个氨基酸序列与TNF配体超家族的其他成员具有一定的同源性。细胞因子受体CD27是肿瘤坏死因子受体(TFNR)超家族的成员，其在细胞生长和分化以及凋亡中起作用。CD27的配体是CD70，属于配体的肿瘤坏死因子家族。CD70为193个氨基酸的多肽，其具有20个氨基酸的亲水性N端结构域和包含2个潜在的N连接糖基化位点的C端结构域(Goodwin，R.G.等(1993)Cell73：447-56；Bowman等(1994)Immunol152：1756-61)。基于这些特性，确定CD70是具有细胞外C端部分的II型跨膜蛋白。

CD70在活化的T和B淋巴细胞以及树突状细胞上瞬时地存在(Hintzen等(1994)J.Immunol.152：1762-1773；Oshima等(1998)Int.Immunol.10：517-26；Tesselaar等(2003)J.Immunol.170：33-40)。除了在正常细胞上表达外，已经在不同类型的癌症中报道了CD70的表达，所述癌症包括肾细胞癌、转移性乳腺癌、脑肿瘤、白血病、淋巴瘤和鼻咽癌(Junker等(2005)J Urol.173：2150-3；Sloan等(2004)Am J Pathol.164：315-23；Held-Feindt和Mentlein(2002)Int J Cancer98：352-6；Hishima等(2000)Am J SurgPathol.24：742-6；Lens等(1999)Br J Haematol.106：491-503)。还提出了CD70与CD27的相互作用在细胞介导的自身免疫疾病和TNF-α产生的抑制中起作用(Nakajima等(2000)J.Neuroimmunol.109：188-96)。

CD27-CD70是共刺激受体-配体分子对，其相互作用提供的共刺激信号在多种自身免疫性疾病的发生、发展中起着促进作用，选择性干预这条共刺激通路能缓解或减轻某些自身免疫性疾病的发展，如sLE、RA。因此其可能成为自身免疫性疾病的一个特异性的治疗靶目标。

CD47是细胞表面免疫球蛋白之一，可以结合整合素和血小板蛋白，涉及多种生理功能，例如细胞转移，T细胞和DC细胞激活，轴突发育等功能。主要的，CD47是通过与吞噬细胞表面的SIRPα相结合，酪氨酸磷酸酶激活，阻止肌球蛋白在吞噬突触亚膜的积累来抑制吞噬作用。在这个过程中，CD47代表的是“别吃我”，来阻碍吞噬作用的自身攻击。实际上，CD47广泛地表达在人体的正常组织上，说明它的调节是广泛的。但同时它也在白血病(AML、慢性骨髓白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(MM)、膀胱癌、实体瘤等细胞表面多表达。CD47在肿瘤细胞上的表达要高于正常细胞的表达，同时帮助肿瘤逃避吞噬细胞监控。因此CD47可以成为免疫治疗的重要靶点。

发明内容

发明目的：针对上述背景技术，本申请提供了一种同时抗CD70和CD47的重链抗体，并提供了其制备方法和应用。

技术方案：本申请所述的一种同时抗CD70和CD47的重链抗体，任选地包含一种或多种选自SEQ ID NO：11的氨基酸序列，其中，

X₁为Q或氨基酸，

X₂为A或氨基酸，

X₃为Q或K，