[发明专利]一种固相荧光免疫检测的原位增强方法

权利要求书

1.一种固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：制备荧光增强剂；

S2：在常规固相基底上进行荧光免疫检测；

S3：将S1中制备的荧光增强剂自组装到S2中常规固相基底上的蛋白质分子表面，进行荧光原位增强。

2.根据权利要求1所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于，所述荧光增强剂为银纳米粒子、金纳米粒子、金-银核壳纳米粒子、金-二氧化硅核壳纳米粒子、银-二氧化硅核壳纳米粒子中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述荧光增强剂为银纳米粒子。

4.根据权利要求3所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述银纳米粒子采用柠檬酸钠还原法制备，其制备方法为：将硝酸银溶液加热到85-100℃，加入柠檬酸钠溶液，持续加热反应30-90分钟后冷却至室温，即得到银纳米粒子；所述柠檬酸钠溶液的加入体积为硝酸银溶液体积的1/50。

5.根据权利要求4所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述硝酸银的摩尔浓度为0.5-5mM；所述柠檬酸钠溶液的质量分数为0.5%-5%。

6.根据权利要求1所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述常规固相基底为氨基化后戊二醛修饰的玻璃基底或者多聚赖氨酸包被的玻璃基底。

7.根据权利要求6所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述常规固相基底为多聚赖氨酸包被的玻璃基底。

8.根据权利要求1所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述荧光免疫检测包括如下步骤：

S2-1：在常规固相基底上滴加抗原溶液，并在30-40℃下孵育1-5小时；

S2-2：孵育完成后，清洗，并用BSA在30-40℃下封闭0.5-3小时；

S2-3：滴加荧光标记抗体，在30-40℃下孵育0.5-3小时；

S2-4：清洗后测量荧光光谱；

其中BSA溶液的质量分数为0.1%-10%；

优选的所述抗原溶液浓度为1 pg/mL-100μg/mL。

9.根据权利要求8所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述抗原溶液的浓度为1μg/mL。

10.根据权利要求1所述的固相荧光免疫检测的原位增强方法，其特征在于：所述荧光增强剂自组装进行荧光原位增强的方法是：

S3-1：将已完成免疫反应的常规固相基底在荧光增强剂中浸泡0.5-24小时；

S3-2：清洗后测量荧光光谱。