[发明专利]用于肟键联的亲核性催化剂

权利要求书

1.一种含有缀合的治疗性蛋白质的药物组合物在制造用于治疗出血性病症的药剂中的应用，所述缀合的治疗性蛋白质包括活化的水溶性聚合物，所述活化的水溶性聚合物通过肟键联与治疗性蛋白质的氧化型碳水化合物部分缀合，

其中，所述水溶性聚合物是PSA，所述活化的水溶性聚合物是活化的PSA且含有活性氨氧基；

其中所述治疗性蛋白质选自由以下组成的组：因子IX(FIX)、因子VIII(FVIII)、因子VIIa(FVIIa)、冯威勒布兰德因子(VWF)、因子V(FV)、因子X(FX)、因子XI(FXI)、因子XII(FXII)、凝血酶(FII)、蛋白质C、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和组织因子(TF)，

其中在所述氧化型碳水化合物部分与所述水溶性聚合物上的活性氨氧基之间形成肟键联；

其中所述氧化型碳水化合物部分通过包括如下步骤的方法制备：所述治疗性蛋白质的碳水化合物部分通过与包含选自由以下组成的组的氧化剂的缓冲液一起孵育而氧化：高碘酸钠(NaIO₄)、四乙酸铅(Pb(OAc)₄)和高钌酸钾(KRuO₄)；

其中所述肟键联的形成由选自由以下组成的组的亲核性催化剂催化：邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸、对氨基苯磺酸、邻氨基苯甲酰胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺、邻茴香胺、间茴香胺和对茴香胺；

其中所述含有活性氨氧基的水溶性聚合物通过包括以下步骤的方法制备：

a)在允许在氧化型水溶性聚合物与活化的氨氧基接头之间形成稳定肟键联的条件下将包含所述氧化型水溶性聚合物的溶液与含有活性氨氧基的所述活化的氨氧基接头一起孵育，所述条件包含介于1分钟与24小时之间的时段；介于2℃与8℃之间的温度；在光存在或不存在下；和在搅拌或不搅拌下；从而形成含有活性氨氧基的水溶性聚合物；和

b)在介于2℃与8℃之间的温度下，通过选自由色谱、过滤、透析和沉淀组成的组的方法来纯化所述含有活性氨氧基的水溶性聚合物。

2.一种含有缀合的治疗性蛋白质的药物组合物在制造用于治疗出血性病症的药剂中的应用，其中，所述缀合的治疗性蛋白质包括活化的水溶性聚合物，所述活化的水溶性聚合物通过肟键联与治疗性蛋白质的氧化型碳水化合物部分缀合，

其中，所述水溶性聚合物是PSA，所述活化的水溶性聚合物是活化的PSA且含有活性氨氧基；

其中所述治疗性蛋白质选自由以下组成的组：因子IX(FIX)、因子VIII(FVIII)、因子VIIa(FVIIa)、冯威勒布兰德因子(VWF)、因子V(FV)、因子X(FX)、因子XI(FXI)、因子XII(FXII)、凝血酶(FII)、蛋白质C、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和组织因子(TF)，

其中在所述氧化型碳水化合物部分与所述水溶性聚合物上的活性氨氧基之间形成肟键联；

其中所述氧化型碳水化合物部分通过包括如下步骤的方法制备：所述治疗性蛋白质的碳水化合物部分通过与包含选自由以下组成的组的氧化剂的缓冲液一起孵育而氧化：高碘酸钠(NaIO₄)、四乙酸铅(Pb(OAc)₄)和高钌酸钾(KRuO₄)；

其中所述肟键联的形成由选自由以下组成的组的亲核性催化剂催化：邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸、对氨基苯磺酸、邻氨基苯甲酰胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺、邻茴香胺、间茴香胺和对茴香胺；

其中所述含有活性氨氧基的水溶性聚合物通过包括以下步骤的方法制备：

a)在允许在非氧化型水溶性聚合物与活化的氨氧基接头之间形成稳定肟键联的条件下将包含所述非氧化型水溶性聚合物的溶液与含有活性氨氧基的活化的氨氧基接头一起孵育，所述条件如下：在光不存在下，在搅拌下将包含所述水溶性聚合物的所述溶液和所述包含活性氨氧基的氨氧基接头在22℃下孵育2小时；所述方法还包括将所述溶液的温度增加到介于32℃与37℃之间的温度并孵育另外12-24小时的步骤，从而形成含有活性氨氧基的水溶性聚合物；和

b)通过选自由色谱、过滤、透析和沉淀组成的组的方法来纯化所述含有活性氨氧基的水溶性聚合物。

3.根据权利要求1所述的应用，其中在光不存在下，在搅拌下将包含所述氧化型水溶性聚合物的步骤a)中的所述溶液和所述包含活性氨氧基的氨氧基接头在4℃下孵育1小时。