[发明专利]一种检测白纹伊蚊抗药性基因突变的引物、探针及方法

权利要求书

1.一种检测白纹伊蚊抗药性基因突变的专用引物对和探针，所述引物对由F和R组成，其特征在于，所述F的核苷酸序列如序列表中SEQ ID №：1所示，所述R的核苷酸序列如序列表中SEQ ID №：2所示；

所述探针包括：

1)探针P1的苷酸序列如序列表中SEQ ID №：3所示核；

2)探针P2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID №：4所示；

3)探针P3的核苷酸序列如序列表中SEQ ID №：5所示。

2.根据权利要求1所述的专用引物对和探针，其特征在于，

探针P1为将3’末端增加MGB基团、5’端标记FAM发光基团后制备得到；

探针P2为将3’末端增加MGB基团、5’端标记FAM发光基团后制备得到；

探针P3为将3’末端增加MGB基团、5’端标记VIC发光基团后制备得到。

3.一种检测白纹伊蚊抗药性基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的专用引物对和探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1)试剂A，所述试剂A包括权利要求2所述的专用引物对探针P2和探针P3；

2)试剂B，所述试剂B包括权利要求2所述的专用引物对探针P1和探针P3；

3)TaqMan反应缓冲液。

5.一种检测或辅助检测白纹伊蚊中kdr基因的突变位点的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1或2所述的专用引物对和探针或权利要求3或4所述的试剂盒进行检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

使用权利要求4所述的试剂A对待测白纹伊蚊进行TaqMan PCR扩增反应，得到A反应产物；

使用权利要求4所述的试剂B对待测白纹伊蚊进行TaqMan PCR扩增反应，得到B反应产物；

检测A反应产物和B反应产物：

若A反应产物在FAM和VIC通道均无信号，且B反应产物仅在FAM通道有信号，则所述kdr基因不含或候选不含有所述突变位点，突变位点所在位置的碱基为TTG/TTG；

若A反应产物在FAM通道有信号且在VIC通道无信号，且B反应产物在FAM和VIC通道均无信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014C，突变位点所在位置的碱基为TGT/TGT；

若A反应产物在FAM通道无信号且在VIC通道有信号，且B反应产物仅在VIC通道有信号，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014F，突变位点所在位置的碱基为TTT/TTT；

若A反应产物在FAM通道有信号且在VIC通道无信号，且B反应产物仅在FAM通道有信号，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014C，突变位点所在位置的碱基为TTG/TGT；

若A反应产物在FAM通道无信号且在VIC通道有信号，且B反应产物在FAM通道和VIC通道均有信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F，突变位点所在位置的碱基为TTG/TTT；

若A反应产物在FAM通道和VIC通道均有信号，且B反应产物仅在VIC通道有信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F和L1014C；突变位点所在位置的碱基为TTT/TGT。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括下述1)-4)中的至少一种：

1)所述TaqMan PCR扩增反应的反应体系中，引物各自的终浓度均为9μM；

2)所述TaqMan PCR扩增反应的反应体系中，探针各自的终浓度均为5μM；

3)所述TaqMan PCR扩增反应的反应体系中，以待测白纹伊蚊的基因组DNA为模板；

4)所述TaqMan PCR扩增反应的退火温度为60℃-65℃。

8.一种检测或辅助检测白纹伊蚊中kdr基因的基因型的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1或2所述的专用引物对和探针或权利要求3或4所述的试剂盒进行检测。