[发明专利]一种多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物及设计、系统进化分析全序列扩增方法

说明书

本发明涉及分子生物技术领域，尤其涉及一种多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物及设计、系统进化分析全序列扩增方法，包括如SEQ ID NO.1~24所示的十二对引物。本发明解决了目前没有能够对多鱗鯔鰕虎魚进行线粒体基因组全序列扩增的问题，具有（1）一次性扩增出其线粒体基因组，通过测序拼接能够快速获得其基因组全序列，便捷高效的优点；（2）提供一种多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物，省时省力，且节约试剂成本；（3）提供的多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物的系统分析方法为多鱗鯔鰕虎魚群体遗传、种质资源保护和可持续开发利用以及鰕虎魚类的系统发育研究提供了重要的分子手段及数据积累等优点。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，尤其涉及一种多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物及设计、系统进化分析全序列扩增方法。

背景技术

鰕虎鱼科，Gobiidae （G. Cuvier, 1816），硬骨鱼纲鲈形目的1科，也是海鱼类中最大的1科，通称鰕虎鱼。有196属1480余种，中国约产40属120余种。体长一般为100～150毫米，最大者不超过500毫米，最小者仅7～9毫米。

体卵圆形、长形或鳗形，侧扁。头侧扁或平扁。眼不突出于头的背面，无游离下眼睑。口大，两颌等长或下颌及颏部突出。上下颌牙多行，有时平直或弯曲，腭骨常无牙。前鳃盖骨边缘光滑或具细锯齿，鳃盖上方有时具凹陷。体被栉鳞或圆鳞，有时鳞退化或完全无鳞。无侧线。背鳍2个或1个，臀鳍常与第二背鳍同形，相对；背、臀鳍有时与尾鳍相连；胸鳍或大或小，圆形，基部肌肉不发达，不呈臂状；左右腹鳍愈合成一吸盘，后缘完整或凹入、尾鳍圆形、尖长或内凹。为暖水性和温水性海水小型鱼类，少数为淡水鱼类。广布于除极地以外的海水和淡水水域，但主要密集于印度-西太平洋暖水区域、大西洋中美洲沿岸及地中海欧洲沿岸亦有。

目前关于多鱗鯔鰕虎魚分类及系统发育等方面的研究，大多基于线粒体单个基因或者少数几个基因序列，关于其线粒体基因组全序列未见报道。考虑到目前多鱗鯔鰕虎魚分类上有争议，且在遗传学，尤其是线粒体基因组方面的信息量非常有限，开展线粒体基因组全序列的研究显得十分必要。

中国专利局于2017年9月29日公开了一种蜘蛛线粒体基因组全序列扩增引物及扩增方法的发明授权，授权公开号：CN104531688B，该发明采用提取蜘蛛基因组的总DNA，通过线粒体基因组DNA的长PCR(L-PCR)扩增和测序对蜘蛛进行鉴定，同样是采用DNA技术对生物进行鉴定，但其仅对蜘蛛线粒体基因组进行全序列扩增，无法解决目前没有能够对多鱗鯔鰕虎魚进行线粒体基因组全序列扩增的问题。

发明内容

为解决上述目前没有能够对多鱗鯔鰕虎魚进行线粒体基因组全序列扩增的问题，提供了一种能够一次性扩增出其线粒体基因组、通过测序拼接能够快速获得其基因组全序列、具有简便、快捷、高效特点的多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物及设计、系统进化分析全序列扩增方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

1. 一种多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物，所述的多鱗鯔鰕虎魚线粒体基因组全序列引物包括十二对引物：其中

第一对引物：

正向引物1如SEQ ID NO.1所示：5’- TAAAGCATAACHCTGAAGATGTTAA - 3’

反向引物1如SEQ ID NO.2所示：5’- GATAGAAACTGACCTGGATTACT - 3’

第二对引物：

正向引物1如SEQ ID NO.3所示：5’- AACHCTGAAGATGTTAAGAT - 3’

反向引物1如SEQ ID NO.4所示：5’- TAAGAATGCAACAGCTAGCAGA - 3’

第三对引物：