[发明专利]牛血清白蛋白磁性仿生免疫分析试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物仿生抗体，其特征在于：该仿生抗体包括牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物微球，所述分子印迹聚合物微球包括磁性纳米微球、包覆在磁性纳米微球表面的二氧化硅界面层以及包覆在二氧化硅界面层上的牛血清白蛋白分子印迹聚合物层；所述牛血清白蛋白分子印迹聚合物层是以牛血清白蛋白为模板分子，通过多巴胺在水相-二氧化硅界面经催化聚合反应并在聚合后去除模板分子而形成的。

2.根据权利要求1所述一种牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物仿生抗体，其特征在于：所述牛血清白蛋白分子印迹聚合物层的厚度为20～40nm，磁性纳米微球的粒径为300～500nm。

3.如权利要求1所述的牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物仿生抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)制备磁性纳米微球；

2)在磁性纳米微球表面包覆二氧化硅，得到SiO₂磁性纳米微球复合物；

3)将聚合单体及作为模板分子的牛血清白蛋白与分散在溶剂中的SiO₂磁性纳米微球复合物混合，得到水相反应体系，水相反应体系通过预聚合反应，以及在加入催化剂后通过聚合反应，在所述SiO₂磁性纳米微球复合物表面包覆结合有模板分子的分子印迹聚合物，得到SiO₂磁性分子印迹纳米微球；

4)除去SiO₂磁性分子印迹纳米微球表面上结合的模板分子，得到牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物微球。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，聚合单体为多巴胺，所述溶剂为pH≤8.5的偏碱性的缓冲溶液，催化剂为过硫酸盐类，模板分子与聚合单体的质量比为1:4～1:12，SiO₂磁性纳米微球复合物与聚合单体的质量比为1:0.5～1:1.5。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，采用洗脱溶剂除去所述模板分子，洗脱溶剂为甲醇-盐酸混合物，其中，甲醇与盐酸的混合体积比为4:1～9:1，盐酸的浓度为1mol/L。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物仿生抗体的制备还包括以下步骤：封闭牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物微球表面的牛血清白蛋白非特异性吸附残基。

7.根据权利要求3或6所述的方法，其特征在于：所述牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物仿生抗体的制备具体包括以下步骤：将50～200mg SiO₂磁性纳米微球复合物均匀分散于20～50mL pH 7.2～7.4的PBS缓冲液中，得微球水相分散液，向微球水相分散液中加入50～200mg多巴胺后于10～40℃下搅拌1～3h，然后加入10～40mg牛血清白蛋白并继续搅拌1～3h，得预聚分散液，向预聚分散液中加入5～20mg过硫酸铵后于10～40℃下搅拌6～24h，然后通过分离得到SiO₂磁性分子印迹纳米微球，利用模板分子洗脱溶剂洗涤SiO₂磁性分子印迹纳米微球，然后洗涤去除残留的所述洗脱溶剂并于40～60℃干燥，得到微球状的牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物。

8.一种牛血清白蛋白仿生免疫分析试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括对牛血清白蛋白具有识别功能的仿生抗体，以及可以在水相中与牛血清白蛋白竞争性结合该仿生抗体的检测标记物，所述仿生抗体包括牛血清白蛋白磁性分子印迹聚合物微球，所述分子印迹聚合物微球包括磁性纳米微球、包覆在磁性纳米微球表面的二氧化硅界面层以及包覆在二氧化硅界面层上的牛血清白蛋白分子印迹聚合物层；所述牛血清白蛋白分子印迹聚合物层是以牛血清白蛋白为模板分子，通过多巴胺在水相-二氧化硅界面经催化聚合反应并在聚合后去除模板分子而形成的。

9.根据权利要求8所述的牛血清白蛋白仿生免疫分析试剂盒，其特征在于：所述检测标记物为Biotin-BSA，所述试剂盒还包括HRP-SA、显色液、样品稀释液、洗涤液和终止液。

10.如权利要求8所述的牛血清白蛋白仿生免疫分析试剂盒在牛血清中BSA的含量分析中的应用。