[发明专利]一种昆虫病原线虫规模化培养的方法及培养装置

说明书

本发明公开了一种昆虫病原线虫规模化的培养方法及培养装置，包括：（1）制备培养基营养液，将培养基营养液灭菌，在灭菌的培养基营养液接种活化线虫共生菌，接种昆虫病原线虫；（2）将海绵放入培养袋，压缩，灭菌；（3）将接种营养液装入培养袋中，静置培养；（4）将步骤S3培育的线虫和培养物浸泡在清水中，分离出海绵，静置，取下层液体。本发明通过压缩海绵及培养袋，减小体积，提高灭菌效率，大大提高生产效率。本发明利用压缩后的负压灌入接种营养液，菌种及线虫的分布更均匀，缩短培养时间，提高产品质量，更易实现大规模培养。

技术领域

本发明涉及生物培养技术领域，更具体地，涉及一种昆虫病原线虫规模化培养的方法。

背景技术

昆虫病原线虫是一种新型的生物杀虫剂，这类线虫具有天敌昆虫兼病原微生物的双重特点，不但能像天敌昆虫通过化学感受器主动寻找和选择寄主，而且他们又都携带共生菌，在侵染寄主体腔的同时，随机释放共生菌，使寄主败血而亡。

昆虫病原线虫作为生物杀虫剂，可以广泛应用于农、林、牧、卫生等方面的害虫防治，取得了明显的经济效益和社会效益。产业化昆虫病原线虫的培养方法已经从活体培养发展到离体培养，离体培养又从无菌培养到单菌培养。目前的现有技术中，昆虫病原线虫的规模化通过在铁盒中的固体培养基上单菌培养。其培养的规模有限，培养的铁盒装置占用空间大，培养前灭菌效率低，盒内接种不均匀及接种细菌感染率高。导致生产的产品昆虫病原线虫的效果欠佳，且批次培养规模较小，培养时间长，无法满足市场上对昆虫病原线虫的需求。本发明提供一种简便的昆虫病原线虫规模化培养的方法及培养装置，更大规模培养昆虫病原线虫，提高生产效率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术中规模化培养的不足，提供一种昆虫病原线虫规模化培养的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

一种昆虫病原线虫规模化培养的方法，其特征在于，制备步骤包括：

S1.制备培养基营养液，将培养基营养液灭菌，在灭菌的培养基营养液接种活化线虫共生菌，培育2～3天，接种昆虫病原线虫；

S2.将海绵放入培养袋，压缩，灭菌；

S3.将接种营养液装入培养袋中，静置培养；

S4.将步骤S3培育的线虫和培养物浸泡在清水中，分离出海绵，静置，取下层液体。

进一步地，步骤S1所述培养液包括：玉米粉4～8wt.％，豆粉3～7wt.％，猪油1～3wt.％，面粉4～8wt.％，虫粉8～12wt.％，余量为纯净水。优选地，玉米粉 5wt.％，豆粉5wt.％，猪油1wt.％，面粉5wt.％，虫粉10wt.％，余量为纯净水。为线虫及共生菌的培养提供营养物质。

进一步地，所述灭菌温度为100～120℃，灭菌时间为30～60min，将培养液、培养袋及海绵中的细菌除去，防止后续线虫的细菌感染，提高生产线虫的产率。

进一步地，所述接种的昆虫病原线虫为侵染期线虫，侵染期线虫的适应性强，培养的存活率高。共生菌可刺激侵染期线虫脱鞘，加快线虫发育速度，有利于缩短线虫培养时间，有利于线虫的快速繁殖。进一步地优选地，所述营养液中接种昆虫病原线虫的密度为8～15尾/mL。

进一步地，步骤S3中向通入培养袋一定量的灭菌空气或纯氧，提供线虫培养所需的空气。

进一步地，步骤S3所述静置培养温度为24～26℃，培养时间为10～15天，可以达到平均一个海绵碎块的达到30万尾的线虫含量。

进一步地，步骤S4所述静置时间为60～120min，保证线虫充分沉降，然后用干燥海绵碎块吸收下层线虫液体，低温保存。