[发明专利]一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于体外检测技术领域，具体涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法。本发明所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括：磁分离试剂和酶标记抗体；磁分离试剂包括：表面上结合有第一抗CK‑MB单克隆抗体和第二抗CK‑MB单克隆抗体的磁微粒；酶标记抗体包括：酶标记的第三抗CK‑MB单克隆抗体；和/或，酶标记的第四抗CK‑MB单克隆抗体；其中，第一、第二、第三和第四抗CK‑MB单克隆抗体分别特异于肌酸激酶同工酶的不同表位。本发明磁分离试剂中的磁微粒的表面上结合有特异于肌酸激酶同工酶的不同表位的第一抗CK‑MB单克隆抗体和第二抗CK‑MB单克隆抗体，可实现多位点识别待测样品中的CK‑MB抗原，增强磁珠抗体与抗原的结合，可避免漏检的情况，灵敏度高，适用人群广泛。

技术领域

本发明属于体外检测技术领域，具体涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

心血管疾病是危害我国人民健康和生命的重大致死性疾病，根据卫生部统计，在我国城市中，每十万人中就有二百三十五人死于心脑血管疾病，占各类疾病引起的死亡的首位，且每年以2％的速度递增。急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)是指因持久而严重的心肌缺血所致的部分心肌急性坏死，是造成心血管病人死亡的主要原因。在临床上常表现为胸痛、急性循环功能障碍以及反映心肌损伤、缺血和坏死等一系列特征性的心电图改变。临床表现常有持久的胸骨后剧烈疼痛、急性循环功能障碍、心律失常、心功能衰竭、发热、白细胞计数和血清心肌损伤标记酶的升高以及心肌急性损伤与坏死的心电图进行性演变。中国的急性心肌梗死发病率近年来呈明显上升趋势，每年新发至少50万，现患至少200万。

肌酸激酶(CK)主要存在于脊椎动物中，也存在于动物的心脏、骨骼肌以及脑等组织的细胞质和线粒体中。CK在人体中存在较广泛，在血中半衰期约为6-8小时。CK用于催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之间磷酸转移的可逆反应，以维持细胞内ATP的生理浓度。CK催化作用是可逆的，即在pH9.0时可催化肌酸和ATP生成磷酸肌酸和ADP，为正反应；也可在pH6.7时催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，为逆反应。其中，在中性条件下，逆反应是正反应的2-6倍，即以生成ATP为主，以保证组织细胞所需的能量来自ATP。正反应有利于线粒体内氧化磷酸化生成的ATP，以磷酸肌酸的形式进入细胞液，供应细胞生理活动的需要。因此，肌酸激酶是一个与细胞内能量转运、肌肉收缩和ATP的再生有直接关系的重要激酶。

CK是一个二聚体，以3种同工酶的形式存在：2个B单体(CK-BB)，2个M单体(CK-MM)，MB的单体混合体(CK-MB)。这3种同工酶分子量相同，催化相同的化学反应，但其分子结构和来源不同：CK-BB来源于横纹肌，CK-MM来源于大脑和消化道，而CK-MB来源于心肌。心肌中CK-MB占CK总量的15％～25％，所以在心肌损伤，特别是急性心肌梗死(AMI)时，测定CK-MB对AMI的诊断有极大的临床意义。有关实验表明，在症状发生后12～48d时采样分析，CK-MB质量的临床灵敏度和临床特异性分别为96.8％和89.6％，这就使它在众多心肌标志物中脱颖而出，成为对AMI临床诊断起重要作用的一个指标。在实际临床诊断中，可通过结合cTnI、Myo等心肌特异标志物的检测结果来进一步提高临床诊断的准确性。

CK-MB的常规测定方法主要为免疫抑制法，测定CK-MB的活力。正常血清中CK同工酶主要为CK-MM、CK-MB和极少量的CK-BB，由于CK-BB的含量极微，可忽略不计，因此此方法假设血清中只有CK-MM和CK-MB，在试剂中加入抗CK-M亚单位的多克隆抗体,从而抑制CK-MM和CK-MB中M亚单位活性,测得结果相当于CK-MB中B亚单位活性,将结果乘以2即相当于CK-MB活力。此方法迅速，简介，省时，有较高的敏感性。然而，该法的影响因素和缺陷众多：

1)酶易于老化

CK-MB活性的酶易于老化，主要表现为酶构象改变。其引起CK-MB活性检测降低或正常的原因可能是由于过了检测时间，以致血清中酶老化使酶的催化活性降低或丧失，从而导致酶的活化能升高所致。