[发明专利]矮生型大叶绣球组织培养方法

权利要求书

1.一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：

1)选择生长健壮无病害的矮生型大叶绣球苗，剪取新生枝条，去除叶片，留部分叶柄，清洗干净备用；

2)在超净工作台上将枝条依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗干净；

3)将枝条切成小段，接入启动培养基中放在培养室中培养；

4)培养一段时间后，腋芽萌发，切下接入增殖培养基中培养；

5)培养一段时间后，基部形成若干不定芽，当芽生长到一定高度后，置于温室驯化；

6)驯化一段时间后，将苗清洗干净，切取不定芽，进行瓶外生根。

2.如权利要求1所述的一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于步骤1)中：采穗母株为容器苗，在3月将苗置入温室，施用氮：磷：钾比例为28:5:5的复合肥3-5g，每天早晚各浇一次水，每隔7d整株喷洒500-700倍多菌灵溶液，30-40d后采集新生枝条；采集的新生枝条，去除叶片，用75％酒精棉球擦拭干净，放入洗洁剂、10％次氯酸钠混合溶液中，在磁力搅拌器上搅拌20-30min，再用自来水冲洗0.5-1h备用。

3.如权利要求1所述的一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于步骤2)中：将枝条用75％酒精浸泡10-15s，倒掉酒精后，用0.1％的升汞溶液浸泡6-15min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液后，用无菌水冲洗5次。

4.如权利要求1所述的一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于步骤3)中：枝条消毒后，用无菌刀切成小段，每茎节一段，上切口紧贴腋芽，下切口距腋芽0.5-1cm，接入启动培养基中；启动培养基配方为B₅基本培养基，添加0.5-1.0mg·L^-16-苄氨基嘌呤、0.1mg·L^-1萘乙酸、0.7％卡拉胶和2.0％蔗糖，pH调至5.4。

5.如权利要求1所述的一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于步骤4)中：培养室中培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光强2500Lx；茎段培养15-18d，腋芽萌发，并抽生幼嫩枝条，将其中大于0.5cm的幼嫩枝条切下，接入增殖培养基；增殖培养基配方为B₅基本培养基，添加1.0-2.0mg·L^-16-苄氨基嘌呤、0.1mg·L^-1萘乙酸、0.7％卡拉胶和1.0％-2.0％蔗糖，pH调至5.4。

6.如权利要求1所述的一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于步骤5)中：幼嫩枝条在增殖培养基培养35-40d，基部形成不定芽，并长出嫩枝，当75％的嫩枝长度达2cm以上，将组培瓶苗置于温室苗床上驯化，75％遮荫。

7.如权利要求1所述的一种矮生型大叶绣球组织培养方法，其特征在于步骤6)中：瓶外生根基质配方为50％泥炭、50％珍珠岩(体积比)，充分搅拌，分装入72孔穴盘中，使用前7d浇透水，使用0.2％-0.3％高锰酸钾消毒；组培瓶苗驯化7d后，将增殖苗用自来水清洗，洗净残留培养基，用刀切取长度大于1.5cm的嫩枝，保留顶端两片叶，去除其它叶片，然后将嫩枝基部在500-700mg·L^-1萘乙酸中速蘸5s，插入基质中，深度为嫩枝长度的1/3，置于全光照喷雾温室中进行生根；全光照喷雾温室在春秋季节平均温度30±2℃，夏季35±2℃，冬季15±2℃，调整喷雾间隔时间和持续时间，使相对湿度冬季保持在60％-70％，其它季节80％-90％，每隔10d喷洒500倍多菌灵溶液；培养35-60d后，形成健壮的生根苗。