[发明专利]检测广谱抗稻瘟病基因PigmR的功能标记及其应用

权利要求书

1.一种检测广谱抗稻瘟病基因PigmR的功能标记，其特征在于，所述功能标记包括引物对GMR-3，所述引物对GMR-3包含GMR-3F和GMR-3R，

所述GMR-3F核苷酸序列为：5’- AGTTCTACTTACGGAGGAGC -3’，

所述GMR-3R核苷酸序列为：5’- AGAATTATGATAAAGAGAAAGGAA -3’。

2.根据权利要求1所述的检测广谱抗稻瘟病基因PigmR的功能标记，其特征在于，所述功能标记包括引物对GMR-3和引物对Actin1-1，所述引物对GMR-3包含GMR-3F和GMR-3R，所述引物对Actin1-1包含Actin1-1F和Actin1-1R，

所述GMR-3F核苷酸序列为：5’- AGTTCTACTTACGGAGGAGC -3’，

所述GMR-3R核苷酸序列为：5’- AGAATTATGATAAAGAGAAAGGAA -3’，

所述Actin1-1F核苷酸序列为：5’- ACAAAGTTTTCAACCGGCCTA -3’，

所述Actin1-1R核苷酸序列为：5’- CTGGTACCCTCATCAGGCATC -3’。

3.权利要求1所述的功能标记的应用方法，其特征在于，通过引物对GMR-3扩增待测水稻基因组DNA样品，并检测扩增产物，如果引物对GMR-3能扩增出98 bp条带，则为含有PigmR基因的样品，如果没有扩增出条带，则为不含有PigmR基因的样品。

4.权利要求2所述的功能标记的应用方法，其特征在于，通过引物对GMR-3和引物对Actin1-1扩增待测水稻基因组DNA样品，并检测扩增产物，如果引物对GMR-3和引物对Actin1-1能同时扩增出146 bp和98 bp条带，则为含有PigmR基因的样品，如果仅能扩增出146 bp条带，则为不含PigmR基因的样品。

5.根据权利要求3或4所述的功能标记应用方法，其特征在于，具体采用以下步骤进行分子标记：

1）水稻植株基因组DNA的提取；

2）PCR扩增：引物对GMR-3和/或引物对Actin1-1加入到PCR反应体系中，并对所述的水稻植株基因组DNA进行扩增得到扩增产物；

3）扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳获得电泳图；

4）根据电泳图分析，如果能扩增出98 bp条带，则为含有PigmR基因的样品，如果没有条带，则为不含有PigmR基因的样品；或如果能同时扩增出146 bp和98 bp条带，则为含有PigmR基因的样品，如果仅能扩增出146 bp条带，则为不含PigmR基因的样品。

6.根据权利要求5所述的功能标记应用方法，其特征在于，所述步骤2）中的PCR扩增体系为水稻植株基因组DNA 2 µL、10×PCR buffer 2 µL、MgCl₂ 2 µL、dNTP 2 µL、GMR-3F 2 µL、GMR-3R 2 µL、Taq酶0.2 µL，ddH₂O 7.8 µL。

7.根据权利要求5所述的功能标记应用方法，其特征在于，所述步骤2）中的PCR扩增条件为94℃5 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃30 s，35个循环；72℃延伸10 min。