[发明专利]一种靶向EGFRvIII的嵌合抗原受体

说明书

本发明涉及一种靶向表达EGFRvIII表面抗原的细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，包含EGFRvIII抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述EGFRvIII结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还涉及编码所述嵌合抗原受体的核酸，还涉及表达所述嵌合抗原受体的重组表达载体。通过将本发明的嵌合抗原受体表达于T细胞中可使得到CAR‑T细胞能够有效并且特异性地靶向表达EGFRvIII表面抗原的恶性肿瘤细胞，从而为治疗一些表达EGFRvIII表面抗原的肿瘤，例如胶质母细胞瘤等，提供更高效的方法。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗领域，更特别地，涉及一种靶向表达EGFRvIII表面抗原的细胞的嵌合抗原受体及其编码序列和表达载体。

背景技术

脑瘤或中枢神经系统肿瘤是死亡率排名第十位的恶性肿瘤。脑瘤内恶性程度较高的为胶质母细胞瘤，约占胶质瘤一半的比例。当前，胶质母细胞瘤的治疗方式主要是手术、放疗和化疗，存在着治愈率低、药物副作用大和复发率高等问题，至今仍没有有效的治疗手段，使得患者生存时间通常少于2年。近年来，随着肿瘤免疫学理论和技术的发展，免疫治疗作为一种新的治疗手段，主要通过人为干预来调动机体自身免疫系统，对癌细胞进行杀灭的作用日益受到重视。

在胶质细胞瘤中检测到表皮生长因子受体(EGFR)的增强表达。EGF受体基因中自发的重排最 先在原发性人成胶质细胞瘤中被鉴定到，并已经在几乎所有情况下在具有EGFR扩增的肿瘤中报道了改变。这些重排导致三种不同类型的突变。最 常见的是III型EGF缺失突变受体(EGFRvIII)，特征在于EGFRmRNA 中外显子2-7的缺失。这些缺失相应于cDNA核苷酸275-1075(编码氨基 酸6-276)，推测由可变剪接或重排引起。EGFR基因的胞外域中801bp 的缺失造成正常EGFR蛋白的读框内截短，导致145kDa受体，由此形成 肿瘤特异的免疫原性表位。EGFRvIII 表达已经在许多肿瘤类型中被观察到，包括多形性成胶质细胞瘤(GBM)， 但是在正常组织中罕见。EGFRvIII在24％到67％GBM病例中表达，并且在存活≥1年的患者中，EGFRvIII表达是一个独立的阴性预后指标。 除了胶质瘤以外，已在导管和导管内乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌以及头颈部鳞状细胞癌等中检测到了EGFRvIII。而相反的是，这些和其他研究中报道正常组 织不表达EGFRvIII。EGFRvIII高度肿瘤特异性的性质使其 成为用于治疗表达这种分子的癌症和肿瘤的特别有用的靶点。

嵌合抗原受体主要由两部分构成，一端位于细胞外能够特异性识别癌细胞表面的某一抗原，另一端位于胞内含有信号激活元件（如T细胞受体的Zeta链），起传递信号激活T细胞的作用。将识别肿瘤表面特异性抗原的单克隆抗体高变区序列在体外重组、亚克隆为单链抗体片段（Single chain antibody fragment of variable regions，scFv），再与其他基因的跨膜蛋白片段和胞内信号肽融合形成人造的嵌合抗原受体（Chimeric antigenreceptor，CAR），转染至T细胞内而形成嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor，CAR-T）。在这种治疗方法中，CAR的作用至关重要。嵌合抗原受体包括单链抗体结构域、跨膜结构域、胞内信号结构域。其中，单链抗体结构域将免疫细胞靶向目标细胞，胞内信号结构域释放胞内信号，启动免疫细胞的杀伤活性。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种靶向表达EGFRvIII表面抗原的细胞的嵌合抗原受 体，其特征在于，包含EGFRvIII结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号结构域，所述EGFRvIII结合结 构域的氨基酸序列.如SEQ ID NO:1所示。

优选地，所述跨膜结构域为CD8，其氨基酸序列序列如SEQ ID NO:2所示。

优选地，所述细胞内信号结构域由CD28、4-1BB和CD3组成，其氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示。