[发明专利]一株ExPEC yhaV-prlF基因缺失株的构建及应用

说明书

本发明公开了一株ExPEC yhaV‑prlF基因缺失株的构建及应用，属于基因工程技术领域。本发明利用DNA同源重组技术构建了一株yhaV‑prlF基因缺失的肠外致病性大肠杆菌（Escherichia coli）ExPEC PPECC42‑ΔyhaV‑prlF，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018686。该菌株被应用于细菌生物被膜形成能力评价及控制ExPEC细菌生物被膜的形成新药物靶标的研究中。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一株ExPEC yhaV-prlF基因缺失株的构建及应用。

背景技术

肠外致病性大肠埃希菌（Extraintestinal Pathogenic E. coli, ExPEC）是一种重要的病原菌，近年来其对畜牧业（猪、禽、牛羊）和人类健康的危害日益受到关注，多重耐药性和生物被膜的形成更增加了其防控的难度和对公共卫生的威胁。ExPEC可以引起人、宠物以及食用动物的肠外感染，比如新生儿脑膜炎、败血症、肺炎和乳房炎。此外ExPEC也是一种重要的食源菌，可通过污染的饮水、食品引起食源性疾病暴发流行；ExPEC菌株目前在不同的国家广泛的从零售鸡肉、牛肉、猪肉、餐馆、即食食品（包括肉类，水果和蔬菜）中分离得到，因此推测肉制品可能是人ExPEC感染的重要来源。

细菌生物被膜（Bacterial Biofilm）是细菌粘附聚集到有生命或无生命固体表面的一种群体性行为，是细菌为了适应环境而长期存活采取的一种策略。生物被膜的形成具有广泛的危害性，一旦形成生物被膜，菌体被大量的胞外基质包裹，形成一个物理屏障，可增强细菌对抗生素、消毒剂、胆盐等化合物的抗性；在生物体内可以抵抗巨噬细胞等吞噬细胞的吞噬作用，逃避宿主的免疫清除；在机体组织表面形成，可以导致慢性感染和持续性感染；在食品加工设备等形成的生物被膜可以导致食源性微生物的传播、食品保存期限缩短。细菌生物被膜的存在将严重威胁畜禽和人类的健康，在食品生产过程中存在的生物被膜，将成为影响公共卫生安全的重要隐患。因此，控制细菌生物被膜的形成在兽医、医学、食品等领域均具有极为重要的意义。

毒素-抗毒素系统（toxin-antitoxin, T-A）广泛存在于细菌基因组中，在细菌的生理活动中发挥着重要作用：维持基因组的稳定性、促进抗生素压力下持留细胞的形成、增强噬菌体感染的耐受性、调控细菌细胞程序性死亡、在细菌致病中发挥作用。因此T-A系统成为了多重耐药病原菌致病机理和防控技术研究的新靶标，引起了国内外研究者的高度关注。

本发明采用ExPEC野生型菌株和构建毒素-抗毒素yhaV-prlF基因缺失菌株来评价YhaV-PrlF系统在ExPEC生物被膜形成中的作用，可作为新的药物靶标来控制ExPEC细菌生物被膜的形成。

发明内容

本发明的目的之一在于构建一株ExPEC yhaV-prlF基因缺失株ExPEC PPECC42-ΔyhaV-prlF，该菌株的分类命名为肠外致病性大肠杆菌（Escherichia coli）ExPECPPECC42-ΔyhaV-prlF，于2018年10月17日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018686，保藏地址为：武汉大学。

本发明的另一目的在于提供一株ExPEC yhaV-prlF基因缺失株ExPEC PPECC42-ΔyhaV-prlF的构建方法。