[发明专利]稻米铁含量快速筛选方法

说明书

本发明公开了一种稻米铁含量快速筛选方法，先将待测水稻糙米和标准品水稻糙米分别进行如下步骤：糙米糊化浸提，加入2M HCl溶液于50±5℃震荡，再依次加入10％的盐酸羟胺溶液、pH＝4.5的乙酸‑乙酸钠缓冲液、10％Triton X‑100溶液、水合红菲绕啉二磺酸钠显色剂溶液后振荡摇匀，于40±2℃静置；将所得待测水稻的糙米反应液和标准品水稻的糙米反应液进行颜色比较；当待测水稻糙米反应液的颜色深于标准品水稻的糙米反应液颜色时，说明待测水稻糙米含铁量高于标准品水稻，颜色越深铁含量越高。本发明可为育种工作者提供一个更为简单、方便、经济、快速、有效的富铁水稻单株筛选方法。

技术领域

本发明涉及水稻糙米含铁量的快速测定技术和筛选方法。

背景技术

谷类作物为人类正常的生长发育提供了其所必需的多种矿质元素。水稻作为我国的主要粮食作物之一，是人体必需营养元素的重要来源。铁是人体必需的矿物元素，在人体中分布很广，其主要功能是作为血红蛋白和其它许多蛋白质及酶类的关键组分，铁在人体中的生理作用主要包括几个方面：参与氧的运输和储存、参与细胞色素和某些金属酶合成并影响其活性、血红蛋白组成部分维持正常造血功能、增强免疫功能等。随着不粘锅等非铁锅烹饪器具的普及，在主食中强化铁营养元素，对防止缺铁而导致的贫血病会产生良好的社会效益。铁元素缺乏和过量都会引起免疫系统的受损，特别是铁元素的缺乏除了会导致贫血也会使母婴的死亡率明显增加，降低婴儿的心智发育和免疫功能，增加工作人员的疲劳感，使工作效率低下。

矿质元素含量的测定方法主要有比色法、离子选择电极法、分子光谱法和原子光谱法等，其中应用最广的为原子光谱法，原子光谱法包括原子吸收光谱法(AAS)、原子荧光光谱法(AFS)和原子发射光谱法(AES)。通过以上方法均可得到准确数据，能够真实反映出稻米中的矿质元素含量，但这些方法都需要高昂的仪器并且需要繁琐的样品前处理程序，不能快速、高效地测定出稻米的矿物质含量，因而不能及时有效地为水稻稻米品质改良工作服务。而常用的分光光度法成本低，操作简单，仪器价格低，常见的主要有常规分光光度法和催化动力学分光光度法等，反应体系的效果取决于显色剂的灵敏性和选择性。催化动力学分光光度法的方法是以被测离子为催化剂，催化氧化剂对有色有机染料的氧化反应。基本依据是有机染料退色的程度与被测离子的浓度成正比。

2013103860236的《富铁水稻快速筛选方法》告知了以下内容：待测水稻为以标准品水稻为基础进行突变或改良所得的水稻，将待测水稻籽粒和标准品水稻籽粒分别进行如下步骤1)～步骤4)；

1)、籽粒糊化：

在4粒水稻籽粒中加入质量浓度为4％的NaOH溶液0.8～1.2mL，在恒温培养箱中于34.5～35.5℃糊化5.5～6.5h，取出后于振荡器上震荡1.5～2.5min，振荡频率为300～350r/min；

2)、在步骤1)的所得物中加入0.4～0.6mL浓度为2M的盐酸进行中和；

3)、在步骤2)的所得物中加入质量浓度为10％的氯化羟胺水溶液0.2～0.3mL、乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.5)0.7～0.8mL、质量浓度为20％的乳化剂OP水溶液0.9～1.1mL；然后用浓度为5M的NaOH溶液调节pH为4.0～5.0，振荡摇匀后静止8～12min；

4)、在步骤3)的所得物中加入0.2～0.3mL的BPT染色液，振荡摇匀后静止8～12min；取位于上层的清液；从而分别获得待测水稻籽粒的反应物和标准品水稻籽粒的反应物；

所述BPT染色液为BPT的质量浓度为0.1％的乙醇溶液；BPT为4,7-二苯基1,10-邻菲罗啉；

5)、将步骤4)所得的待测水稻籽粒的反应物和标准品水稻籽粒的反应物进行颜色的比较；

如果待测水稻籽粒的反应物的颜色比标准品水稻籽粒的反应物颜色深，则说明待测水稻籽粒的含铁量高于标准品水稻。