[发明专利]一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法

权利要求书

1.一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法，其特征在于：使用乙酰辅酶A羧化酶抑制剂对盐生杜氏菌进行驯化，具体包括如下步骤：

（1）将盐生杜氏藻接种于f/2液体培养基，同时添加不同浓度的乙酰辅酶A羧化酶抑制剂，同时以未添加乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的f/2液体培养基的培养过程作为对照，确定适合驯化的乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的适宜浓度；所述乙酰辅酶A羧化酶抑制剂为稀禾啶，浓度为150~700μmol/L；适宜浓度为400~430μmol/L；

（2）将盐生杜氏藻接种至含有上述适宜浓度的乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的f/2液体培养基中，在正常条件下进行驯化培养，获得驯化培养液；

（3）按照一定的周期对驯化培养液进行传代，使用含有上述适宜浓度的乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的f/2液体培养基作为传代培养基；其中，传代的周期为1~5d，并使用处于对数生长期，OD₆₉₀为0.1~0.5的藻液作为种子液，按照5~20%的接种量进行传代；

（4）当传代至一定次数后，将所得藻种接种至不含乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的f/2液体培养基中，培养至藻液OD₆₉₀达到1.0时，测定其中藻体生物量和油脂含量，并分析油脂组成，获得驯化藻种；

（5）将所得驯化藻种继续接种于不含乙酰辅酶A羧化酶抑制剂的f/2液体培养基中，传代一定次数，培养至藻液OD₆₉₀达到1.0时，测定培养液中藻体生物量和油脂含量，并分析油脂组成，以验证所得驯化菌株的遗传稳定性；

上述培养均为光照培养，光照培养的温度为22~28 ℃，光照强度5000~10000 lx，光暗比12 h:12 h，培养过程不充气，每日随机调换摇瓶位置并摇动2~3次。