[发明专利]一种调控甘蓝型油菜粒色的转基因表达载体及其构建方法和应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种调控甘蓝型油菜粒色的转基因表达载体及其构建方法和应用,所述甘蓝型油菜粒色的转基因表达载体为RNAi‑BnMYB47转基因表达载体，所述RNAi‑BnMYB47转基因表达载体的RNAi片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，通过克隆BnMYB47基因的RNAi片段，然后与pFGC5941M质粒连接、转化并抽提质粒制得。本发明所提供的BnMYB47基因的RNAi片段和表达载体可应用于调控甘蓝型油菜粒色，克服了甘蓝型油菜粒色性状不稳定，难以获得稳定的黄籽油菜育种的困难，为获得稳定遗传的甘蓝型油菜转基因黄籽新种质材料创造了条件，对油菜黄籽育种和对基因工程进行油菜品质的遗传改良和育种实践具有重要指导意义。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种调控甘蓝型油菜粒色的转基因表达载体及其构建方法和应用。

背景技术

油菜是世界五大油料作物之一，在世界油料作物中占有重要地位。种子作为油菜的主要收获器官，而种皮约占种子干重的10-20％，占饼粕干重的20-30％，种皮富含色素与多酚物质，还会严重影响油品质及饼粕饲用价值。因此，改良甘蓝型油菜种子的构成和提高单位面积单位含油量是甘蓝型油菜育种的主要目标之一。而甘蓝型黄籽油菜具有种皮薄，蛋白质和含油量高，饼粕蛋白含量高、纤维素和色素等有毒物质含量低等优点成为近年来油菜育种的重要目标之一。

大量研究表明，甘蓝型油菜种皮色泽的变化主要受原花色素、多酚和木质素及其衍生物等重要次生代谢物质的影响，控制类黄酮合成途径相关基因也在种皮色泽形成中扮演着重要角色。在芸薹属作物种子中类黄酮物质主要由山萘酚衍生物、槲皮素衍生物、异鼠李素衍生物和表儿茶素糖苷四类组成，类黄酮也是影响种皮色泽性状的重要因子。由于这些物质成分的复杂性，且不同植物种子中类黄酮物质含量还受基因型及环境条件的影响。作为植物中最大的转录因子之一，MYB转录因子广泛参与植物各种生物过程的调节，对于植物的生长发育过程中有着非常重要的作用。其中R2R3-MYB类转录因子通过广泛参与植物苯丙烷-类黄酮代谢途径中的多种初生和次生代谢过程，在组织器官最终颜色形成中发挥重要作用。但缺乏天然的黄籽基因资源，且粒色遗传机理复杂，性状不稳定，导致其遗传和分子机理研究进展缓慢，是稳定的黄籽油菜育种的主要难点。

因此，针对以上难点，本发明发现并揭示了基因BnMYB47在调控甘蓝型油菜粒色方面的生物学功能，通过LC-MS方法测定对照与转基因株系不同发育期种皮中类黄酮组分，明确其种皮色泽差异的主要原因；通过转录组测序和基因表达模式分析，揭示BnMYB47参与调控甘蓝型油菜种皮差异的关联。本发明所提供BnMYB47转基因载体和构建方法，对油菜黄籽育种和对基因工程进行油菜品质的遗传改良和育种实践具有重要指导意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一是提供一种调控甘蓝型油菜粒色的RNAi-BnMYB47转基因表达载体，对油菜黄籽育种和对基因工程进行油菜品质的遗传改良和育种实践具有重要指导意义。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种调控甘蓝型油菜粒色的RNAi-BnMYB47转基因表达载体，所述RNAi-BnMYB47转基因表达载体的RNAi片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

其次，本发明的第二个目的在于提供一种调控甘蓝型油菜粒色的RNAi-BnMYB47转基因表达载体的构建方法，通过此构建方法能够准确得到所述RNAi-BnMYB47转基因表达载体。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

构建所述的RNAi-BnMYB47转基因表达载体的方法，包括以下步骤：

1)克隆BnMYB47基因的RNAi片段：根据BnMYB47基因基因设计的RNAi引物，以甘蓝型油菜黑籽品系中油821的cDNA为模板，进行PCR反应，得阳性克隆子；