[发明专利]一种提高薯蓣皂苷元含量的黄姜培育方法

权利要求书

1.一种提高薯蓣皂苷元含量的黄姜培育方法，其特征在于：该培育方法的详细步骤如下：

1）培育材料的优选：选择黄姜优良种质资源作为培育材料，并挑选田间生长健壮、无病害的雄性单株采集花蕾；

2）花蕾前处理与表面消毒：在黄姜的盛花期，上午10点前采集雄性单株上的花蕾，并从中筛选出小孢子发育时期处于单核靠边期的花蕾，洗净后用湿纱布包裹装于培养皿中，在4℃冰箱放置3~5d，然后将花蕾取出，在室温下用超声波处理30min；接下来对处理后的花蕾进行表面消毒：先用75%乙醇消毒60s，蒸馏水冲洗1~2次，再用1.5%次氯酸钠消毒20~30min，蒸馏水冲洗3~4次，用滤纸吸干花蕾表面的水分；

3）花药接种与诱导：在无菌工作台上，用解剖针和镊子从上述处理后的花蕾中剥离出花药，接种在诱导培养基上，在温度26~28℃、避光的条件下培养28~35d诱导出愈伤组织；

4）愈伤组织分化：当诱导出的愈伤组织长到1.5~2.5cm后，将其转接到分化培养基上，先在温度26~28℃、光照强度800~l200lx、光照时间9~11h/d的条件下培养7d，再在温度24~26℃、光照强度2000~2500lx、光照时间11~13h/d的条件下进行培养，每25d左右继代1次，直至愈伤组织分化成幼苗；

5）幼苗生根：将高度在3cm左右的幼苗单株切下接种到生根培养基上，在温度24~26℃、光照强度2500~3000lx、光照时间11~13h/d的条件下培养25~30d，幼苗长出旺盛的根系，形成完整的花培再生植株；

6）植株倍性鉴定，筛选出二倍体花培再生植株：运用流式细胞仪技术对花培再生植株进行倍性鉴定，以黄姜正常二倍体植株（2n=2x=20）作为参照，筛选出花培再生植株中的二倍体植株；

7）驯化后大田定植：将筛选出的二倍体植株移栽到装有栽培基质的育苗杯中，放入温室，在温度20~30℃、相对湿度70~80%、自然光照的条件下驯化1个月，然后将其定植到大田里，进行常规田间管理；

8）将黄姜超雄株和雌株进行杂交，获得雄性新品系：等到大田定植的黄姜二倍体植株生长发育进入花期，根据开花特性辨别出超雄株和雌株，将二者进行人工杂交授粉，收获的杂交F1代种子即为雄性新品系。

2.根据权利要求1所述的一种提高薯蓣皂苷元含量的黄姜培育方法，其特征在于，所述步骤2）中筛选出小孢子发育时期处于单核靠边期的花蕾的方法为：挑取花蕾中的花药于载玻片上，滴一滴卡宝品红溶液染色，用镊子将花药捣碎使其散出花粉小孢子，然后移去花药壁残渣，盖上盖玻片，在显微镜下观察小孢子的发育时期。

3.根据权利要求1所述的一种提高薯蓣皂苷元含量的黄姜培育方法，其特征在于，所述步骤2）中超声波处理的频率为40KHz，功率为200W。