[发明专利]NK细胞联合间充质干细胞在治疗肝炎及肝纤维化中的应用

权利要求书

1.一种NK细胞联合间充质干细胞、及其组合物和制剂在制备治疗肝炎及肝纤维化的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NK细胞和间充质干细胞的个数比为5-6:20-30。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用进一步包括将NK细胞和间充质干细胞分别进行培养后混合的步骤。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述NK细胞的培养具体方法为：将NK细胞在第一培养基中培养，当培养的细胞密度达到(2-3)×10⁷个/mL后，加入第二培养基进行传代培养，收集第四代间充质干细胞；所述间充质干细胞的培养具体方法为：将间充质干细胞在第三培养基中培养，当培养的细胞汇合达到85-90％后，加入第二培养基进行传代培养，收集第四代间充质干细胞。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成，所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为2-5μg/mL聚丙烯酸钠、5-10μg/mL亚硒酸钠、5-10μg/mL半胱氨酸、20-25μg/mL甘露醇、1-3μg/mL丝氨酸、3-5μg/mL马齿苋水提物和5-10μg/mL侧伯叶水提物。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成，所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为7％-12％，所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为2-5μg/mL谷胱甘肽、15-20μg/mL柠檬酸铁、7-12μg/mL成纤维细胞生长因子、5-10μg/mL生物素、2-5μg/mL氯化硒、3-5μg/mL人白蛋白、1-3μg/mL夏枯草水提取和1-3μg/mL艾叶水提物。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述第三培养基由DMEM培养液和第三添加剂组成，所述第三添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1-3μg/mL二乙醇胺、5-10μg/mL月桂酰丝氨酸、1-3μg/mL半胱氨酸、10-15μg/mL山梨醇、5-10μg/mL脯氨酸、1-3μg/mL维生素C、5-10μg/mL野菊花水提取和5-10μg/mL筋骨草水提物。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物由NK细胞、间充质干细胞和中药提取物组成，所述NK细胞的浓度为5×10⁵-6×10⁵个/mL，所述间充质干细胞的浓度为2×10⁶-3×10⁶个/mL，所述中药提取物的浓度为15-20mg/mL，所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成：

仙鹤草5-10 密蒙花15-20 淡竹叶5-10 紫苏子1-3。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述中药提取物是通过如下方法制备得到的：

将仙鹤草、密蒙花、淡竹叶和紫苏子粉碎，用水煎煮2次，第一次用水量为药材总重的5倍，煎煮3h，第二次用水量为药材总重的3倍，煎煮2h，合并煎煮液，过滤，滤液用活性炭脱色，先用石油醚萃取，弃去有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，弃去有机相，水相，浓缩，干燥，得中药提取物。

10.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为注射液，所述注射液由间充质干细胞、NK细胞或含有间充质干细胞和NK细胞的组合物、生理盐水及辅料组成，每mL所述生理盐水含有2×10⁶-3×10⁶个间充质干细胞及5×10⁵-6×10⁵个NK细胞和/或15-20mg中药提取物，含有10-20mg辅料，所述辅料由如下重量份的成分组成：

甘氨酸5-10 葡甲胺2-4

甘油1-3 聚乙二醇1000 3-5。