[发明专利]靶向CD5的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了一种编码靶向CD5的嵌合抗原受体的核酸分子，所述嵌合抗原受体包含胞外区、跨膜区和胞内信号转导区，其编码的所述胞外区包含CD5结合结构域，所述CD5结合结构域为如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。通过流式细胞术、脱颗粒分析实验、ELISA检测NK细胞分泌的细胞因子，证明该CD5 CAR NK细胞对表达CD5的血液肿瘤细胞有很强的杀伤作用，而对不表达CD5的细胞杀伤作用很弱，有效防止了脱靶效应。本发明嵌合抗原受体CD5 scFv‑CD8α‑4‑1BB‑CD3ζ可用于CD5阳性的淋巴细胞血液肿瘤的治疗。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及靶向CD5的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

近年来，嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)免疫疗法已成为强有力的一种新的过继免疫治疗技术，其对许多实体肿瘤、血液系统肿瘤，尤其是B细胞淋巴瘤治疗效果明显。CAR治疗利用改良的患者的T细胞可以突破MHC限制性直接识别肿瘤抗原，靶向清除恶性肿瘤。CAR-T细胞在血液肿瘤中已经被广泛应用，特别是CD19作为靶抗原的CAR-T细胞免疫治疗已获得突破性进展。然而，CAR-T细胞和恶性T细胞之间靶抗原的共同表达所导致的自我靶向杀伤问题限制了CAR-T在T细胞血液肿瘤中的应用。

NK细胞是一种细胞毒性淋巴细胞，为固有免疫系统的重要组成部分。NK细胞因其特殊的识别靶细胞的机制、短暂的生理周期、广泛的肿瘤杀伤能力等优势，被视为同样具有潜力通过CAR修饰增强其抗肿瘤能力的效应细胞。重要的是，NK细胞缺乏与T细胞共享的抗原，有效避免了自我靶向的问题。此外，在许多针对实体瘤和血液恶性肿瘤的临床试验中被验证有效的同时，也被证实几乎没有移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GvHD)的风险。

CAR-NK的细胞来源除了原代细胞外，还有许多成熟的细胞系，包括NK-92、NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS和NKL等，其中NK-92应用最为广泛。NK-92来源于一名患有非霍奇金淋巴瘤的女性外周血，于1992年建立，是一株IL-2依赖的永生细胞系。NK-92具有强大的细胞毒性，其在体外扩增得到的细胞群体一致性更好，且NK细胞系并不涉及分选纯化步骤。相较于原代NK细胞，NK-92最大的优势在于其表面的抑制性受体表达很低，抑制性受体信号的缺失使得其对多种肿瘤的杀伤能力要优于原代NK细胞。此外，NK-92在实体瘤治疗中也有一定的潜力。CAR-T在实体瘤中效果不佳的重要原因是，肿瘤细胞高表达PD-L1与T细胞表面的PD-1结合进而抑制了其杀伤活性，NK-92表面抑制性受体的缺失使之能够避免类似抑制信号的干扰。

CD5是正常T细胞表面的一种分化抗原，而NK细胞(NK-92细胞系)表面并不表达。此外，CD5是大多数淋巴细胞肿瘤，包括T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL),慢性淋巴细胞白血病(CLL),T细胞淋巴瘤及部分B细胞淋巴瘤的特征性的表面标志，且其并不表达于正常的造血干细胞及其他类型的非造血细胞，因此作为淋巴细胞肿瘤抗原的特异性高，可成为淋巴细胞恶性肿瘤中的理想治疗靶点。

目前市场上的靶向CD5的嵌合抗原受体对表达CD5的淋巴瘤细胞和淋巴细胞白血病细胞的杀伤效果不佳，无法更好地满足临床治疗要求，因此急需寻找一种新的靶向CD5的嵌合抗原受体来解决上述问题。

发明内容

本发明的一个方面，是针对现有技术中靶向CD5的嵌合抗原受体对表达CD5的淋巴瘤细胞和淋巴细胞白血病细胞的杀伤效果不佳，无法更好地满足临床治疗要求，提供了一种CD5特异性的嵌合抗原受体，该CAR特异性结合到靶抗原上，并发挥针对表达CD5的淋巴瘤细胞和淋巴细胞白血病细胞的细胞毒效应。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

编码靶向CD5的嵌合抗原受体的核酸分子，所述嵌合抗原受体包含胞外区、跨膜区和胞内信号转导区，其编码的所述胞外区包含CD5结合结构域，所述CD5结合结构域为如SEQID NO.3所示的氨基酸序列。