[发明专利]一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法，该方法包括将脱脂灵芝孢子粉，超声提取，板框过滤后，得到的滤液依次通过质量浓度为75％的乙醇和质量浓度为85％的乙醇进行沉淀过滤，得到的多糖对于动物移植性肿瘤的抑制作用显著。

技术领域

本发明属于中药制药领域，具体地说，涉及一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法。

背景技术

灵芝是我国传统名贵中药材之一，被誉为“仙草”。在中华传统文化中，有着极高的美誉度。灵芝中的赤芝、紫芝，已被《中华人民共和国药典》所收载，明确其具有“补气安神，止咳平喘。用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘，虚劳短气，不思饮食”等功能主治。

灵芝孢子是灵芝在生长成熟期，由菌盖中弹射出来的灵芝的繁殖细胞即灵芝的种子。灵芝孢子具有增强机体免疫力、抑制肿瘤、保护肝损伤、抗辐射等多种功效，目前已广泛地应用于药品及保健食品中。

灵芝孢子中目前比较公认的有效成分为多糖类和三萜类。多糖为真菌目有的水溶性有效成分之一，经研究具有增强人体免疫细胞活性、抑制肿瘤细胞生成等多种作用。但天然真菌中所含多糖含量一般较低，如何将天然真菌多糖分离、纯化、富集，一直是近年来相关科研工作者努力的方向。

发明内容

本发明的目的是将灵芝孢子中的多糖类有效成分进一步浓缩精制，并富集为功效最强的分子量排布段，作为相应药品及保健食品的有效原料成分。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：

一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法，包括将脱脂灵芝孢子粉采用超声提取，板框过滤后，得到的滤液再依次通过质量浓度为75％的乙醇进行沉淀过滤和质量浓度为85％的乙醇进行沉淀过滤，取最终沉淀物。该最终沉淀物再加少量无水乙醇清洗，烘干。

上述所取用的脱脂灵芝孢子粉中含油脂＜1.0％，多糖＞1.2％。

上述脱脂灵芝孢子粉可以通过将新鲜的灵芝孢子破壁后，加入适量水挤压造粒，干燥后采用CO₂超临界萃取脱油得到；所述的CO₂超临界萃取方法优选为：萃取温度35～65℃，萃取压力20～35Mpa，萃取时间2～7小时，CO₂流量0.5～1m³/h。所述干燥温度优选为50℃～70℃，进一步优选60℃。

所述的超声提取为加入脱脂灵芝孢子粉1.5～2.3倍重量水，50℃～70℃超声提取，超声功率15～26千瓦，超声时间1～3小时；优选所述的超声提取为加入脱脂灵芝孢子粉2倍重量水，60℃超声提取，超声功率20千瓦，超声时间1小时。

上述通过质量浓度为75％的乙醇沉淀过滤具体如下：将板框过滤得到的滤液加入滤液2倍体积的质量浓度为75％乙醇，静置过夜，弃去沉淀物。

上述通过质量浓度为85％的乙醇沉淀过滤具体如下：取经质量浓度为75％的乙醇沉淀后得到的上清液缓慢加入95％乙醇至乙醇浓度达到85％，静置，过滤，取沉淀物。所述静置条件优选为4℃静置12小时。

现阶段的多糖制品多为未经分离、精制、筛选等优化工艺而制成的粗多糖制剂，不利于发挥多糖的最佳功效。粗多糖组成成分复杂，除主要含有多糖的不同组分外，还含有蛋白质、生物碱及其他水溶性成分等，有些多糖与色素、蛋白质结合，影响多糖的构象变化，相应多糖的活性会受明显的影响。此外，不同来源的多糖作用不一，配伍后同样存在协同作用。所以，多糖的不同提取纯化工艺影响着多糖的构成基础，从而对多糖的活性有一定程度的影响，因此控制其相对分子质量显得非常必要。

通过本发明可知，灵芝孢子多糖抑瘤活性与相对分子质量大小有关，相对分子质量在1000～500000之间的多糖成分活性较强，由此可见不同的多糖产生生物学活性有其最佳相对分子质量范围。

附图说明

图1HPGPC标准分子量拟合曲线

具体实施方式