[发明专利]一种用于酸菜腌制的直投式复合乳酸菌发酵剂的制备方法

权利要求书

1.一种用于酸菜腌制的直投式复合乳酸菌发酵剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：分别将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌及鼠李糖乳杆菌分别扩大培养，离心弃掉上清，菌泥加入保护剂经真空冷冻干燥制得粉末，按照一定比例混合均匀，即可用于酸菜发酵；

所述的保护剂的配方为：以加入到菌泥后的重量百分比计：10%~15%脱脂乳，2~5%海藻糖，0.5~2%麦芽糊精，0.8%~1.2%甘油；

所述的复合乳酸菌发酵剂中，植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：鼠李糖乳杆菌的比例为1~1.2:1:0.8~1；

所述的植物乳杆菌为发明人培育的一株植物乳杆菌lactobacillus plantarum；该株植物乳杆菌已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.16478，保藏日期：2018年9月17日。

2.如权利要求1所述的用于酸菜腌制的直投式复合乳酸菌发酵剂的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

A、发酵菌株的选择及培养基的制备

本发明所述复合乳酸菌发酵剂所选菌种为：植物乳杆菌，嗜酸乳杆菌，鼠李糖乳杆菌；

选用MRS液体培养基：蛋白胨8~15g，酵母膏3~8g，柠檬酸二铵1~3g，牛肉膏8~12g，葡萄糖15~25g，吐温80 0.5~2mL，乙酸钠3~6g，磷酸氢二钾1~3g，硫酸镁0.1~0.3g，硫酸锰0.03~0.08g，溶于1000mL蒸馏水，固体培养基则另加12~18g琼脂粉，120~125℃灭菌15~25分钟；

B、用于酸菜腌制的直投式复合乳酸菌发酵剂的制备

B.1 菌种的活化

将三种乳酸菌菌粉分别于35~38℃水浴中复水8~12min，接种到MRS液体培养基中，35~38℃厌氧培养18~30h，接种到MRS固体平板上，35~38℃培养2~3天，用接种环挑取单菌落于MRS液体培养基中，35~38℃厌氧培养18~22h，以1.2~1.8%的接种量接种于MRS液体培养基中，重复转接两次即完成活化；

B.2 菌种的扩大培养

将活化好的菌种以1.2~1.8%的接种量接种于40mL MRS液体培养基中，35~38℃厌氧培养18~22h，继续以1.2~1.8%的接种量接种于400mL MRS液体培养基中，35~38℃厌氧培养18~22h，检测乳酸菌数量≥10⁹个/mL，若未达到数量要求则需继续培养；

B.3 菌种冻干粉末的制备

收集三种乳酸菌发酵液，4℃条件下5000~7000r/min离心8~12分钟，弃上清，收集菌体沉淀，用冻干保护剂洗脱沉淀，保护剂：沉淀=2~3:1；收集保护剂和菌泥混合物，铺到平板中，厚度在1.5~2cm，-85~-75℃冷冻过夜，用真空冷冻干燥机进行真空冷冻干燥，冷冻温度-55~-45℃，真空度1Pa，冷冻干燥18~30h，得到乳酸菌粉末；

B.4直投式发酵剂的复配

将三种乳酸菌粉末按照重量称取，按照比例分别称取三种乳酸菌粉末，并混合均匀，得到复合乳酸菌发酵剂。

3.如权利要求1-2任一所述的用于酸菜腌制的直投式复合乳酸菌发酵剂的使用方法，其特征在于，复合乳酸菌发酵剂的使用方法，包括以下具体步骤：

挑选新鲜、完整、无腐烂变质的白菜8~12kg，晾晒两天除去水分，去除外层叶片，去除根部，清洗整理码入坛中，压实，将自来水煮沸冷却，配制质量分数为1~3%的食盐水10kg，称取1~3g复合乳酸菌发酵剂，倒入盐水中，充分混匀，将盐水注入坛中，没过白菜15cm为宜，密封坛口，坛口周围水封以隔绝氧气，于20~23℃下发酵22~25天。

4.如权利要求3所述的用于酸菜腌制的直投式复合乳酸菌发酵剂的使用方法，其特征在于，加入的复合乳酸菌发酵剂的用量为白菜重量的0.01~0.03%。