[发明专利]一种肠外致病性大肠杆菌重组菌株及其应用

说明书

本发明公开了一种肠外致病性大肠杆菌重组菌株及其应用，属于微生物与免疫技术领域。本发明的肠外致病性大肠杆菌重组菌株为同时缺失kpsM基因和iucB基因且可过表达OmpC蛋白或OmpF蛋白的大肠杆菌PCN033。本发明的肠外致病性大肠杆菌重组菌株，同时缺失了kpsM基因和iucB基因，其毒力与亲本菌相比大大降低了，以其作为疫苗安全性高；其可以过表达OmpC蛋白或OmpF蛋白，对小鼠的免疫保护率达到了100％，具有很好的应用价值。

技术领域

本发明涉及微生物与免疫技术领域，具体涉及一种肠外致病性大肠杆菌重组菌株及其应用。

背景技术

大肠埃希菌俗称大肠杆菌，是一类在自然界中广泛分布的革兰氏阴性菌。根据其致病性及致病机理的不同，大肠杆菌被划分为共生型大肠杆菌(Commensal Escherichiacoli)、肠道致病性大肠杆菌(Intestinal pathogenic Escherichia coli，IPEC)以及肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal pathogenic Escherichia coli，ExPEC)。

肠外致病性大肠杆菌可以广泛定殖于人和动物等多种宿主肠道外组织并引发严重的感染，如泌尿系统感染、脑膜炎、败血症、肺炎、腹膜炎等，其不同于传统的共生型大肠杆菌和经典的肠道致病性大肠杆菌，已被证实为严重危害家畜、家禽、以及人类公共健康的一类人兽共患性大肠杆菌，也是近年来医学界和学术领域报道和关注较多的一类重要致病菌。兽医临床上，华中农业大学农业微生物国家重点实验室2004年以来持续对全国不同省市、地区的发病猪场及送检病料进行病原检测与分离鉴定，已从发病或死亡猪群的肠外组织(肺、脑、肾、淋巴结、关节、血液等)中分离出近千株ExPEC菌株，初步的流行病学统计显示，ExPEC已经成为严重威胁我国养猪业的重大细菌性病原之一。与此同时，ExPEC菌株耐药现象普遍，且与其他病原混合感染严重，给养猪业造成了巨大的损失，并增加了高昂的疫病防控成本。可以说，由ExPEC引起不同宿主的相关疫病已经成为严重影响人类健康、食品安全和畜牧养殖业发展的一类重要人畜共患传染病。目前针对临床上流行广和发病率高的肠外致病性大肠杆菌并没有商业化的疫苗可用。

发明内容

本发明的目的在于提供解决现有技术存在的问题，提供一种低毒、安全性高、免疫保护效果好的肠外致病性大肠杆菌重组菌株及其应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种肠外致病性大肠杆菌重组菌株，为同时缺失kpsM基因和iucB基因且可过表达OmpC蛋白或OmpF蛋白的大肠杆菌PCN033。其中，OmpC蛋白、OmpF蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、2所示。

所述的肠外致病性大肠杆菌重组菌株的构建方法，包括如下步骤：

(1)将编码OmpC蛋白或OmpF蛋白的基因片段连接到表达载体上，构建重组载体。所述的表达载体优选为PHSG396。

(2)将重组载体转入到同时缺失kpsM基因和iucB基因的大肠杆菌PCN033中，得到肠外致病性大肠杆菌重组菌株。其中，同时缺失kpsM基因和iucB基因的大肠杆菌PCN033为PCN033ΔkpsM-ΔiucB，其构建详见《猪肠外致病性大肠杆菌分离鉴定及双基因缺失突变株构建》[学位论文]张茹2013-华中农业大学:兽医。

所述的肠外致病性大肠杆菌重组菌株毒力低，免疫保护效果好，可用于制备防控肠外致病性大肠杆菌的疫苗。

一种大肠杆菌疫苗，包含所述的肠外致病性大肠杆菌重组菌株，还可以包含其药学上可接受的佐剂。