[发明专利]嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scfv-NKp44及其用途

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scFv-NKp44，其特征在于，所述嵌合抗原受体由胞内第二传导结构域DAP12、T2A、CD8α信号肽、抗人CD19单克隆抗体FMC63轻链和重链可变区CD19scFv、胞内第一传导结构域NKp44串联构成。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scFv-NKp44，其特征在于，所述嵌合抗原受体含有针对人CD19抗原的单链抗体CD19scFv，其核酸序列如SEQ IDNO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，或与其具有85％-99％同一性的氨基酸序列；所述单链抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)之间由连接肽(Linker)连接，包含GSLinker如(G₃S)₄或(G₄S)₃，优选(G₄S)₃连接肽。

3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scFv-NKp44，其特征在于，第二传导结构域DAP12通过T2A与胞外信号肽和抗原结合结构域串联；优选的，所述DAP12核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或与其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽；所述T2A核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，氨基酸序列如SEQID NO.6所示，或与其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽。

4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scFv-NKp44，其特征在于，胞外信号肽选自核苷酸如SEQ ID NO.7所示的CD8α信号肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，或与其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽；胞内第一传导结构域选自核苷酸如SEQ ID NO.9所示的NKp44，NKp44氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，或与其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽。

5.一种编码如权利要求1-4中任一项所述的靶向CD19嵌合抗原受体的核酸。其特征在于，所述嵌合抗原受体的核酸序列如SEQ ID NO.16所示；所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.20所示，或与其具有85％-99％同一性的氨基酸序列。

6.一种重组表达载体，其特征在于包含权利要求5所述的核酸分子。

7.一种制备权利要求1所述的嵌合抗原受体修饰的T细胞的方法，其特征在于该方法包括分离和激活待修饰的T细胞，然后以权利要求6所述的重组表达载体转导该T细胞。

8.一种如权利要求6所述的重组表达载体的嵌合抗原受体的细胞；其特征在于所述的细胞选自免疫细胞；所述的细胞选自T淋巴细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、间充质干细胞、造血干细胞、多能干细胞或胚胎干细胞培养分化的免疫细胞。

9.一种药物组合物，其特征在于包含有效量的权利要求8中任一项所述的细胞和药学上可接受的载体。

10.权利要求1-4中任一项所述的靶向CD19嵌合抗原受体，权利要求5中任一项所述的核酸，权利要求6所述的重组表达载体以及权利要求8所述的宿主细胞在制备哺乳动物肿瘤治疗药物中的应用；优选在制备血液恶性肿瘤治疗药物中的应用。