[发明专利]一种高速逆流色谱制备伏马毒素B1

说明书

本发明涉及一种高速逆流色谱制备伏马毒素B₁标准品的方法，属于农产品安全检测技术领域；该方法包括样品提取、反相柱层析粗纯化、高速逆流色谱精制；本发明高速逆流色谱制备伏马毒素B₁标准品的方法稳定，能够适用于大米、小麦等多种谷物基质中伏马毒素B₁的制备，制备量大、回收率高、成本低廉，能单次制备250mg以上纯度大于95%的伏马毒素B₁标准品,单次成本仅为500元左右。

技术领域

本发明涉及一种高速逆流色谱制备伏马毒素B₁标准品的方法，属于农产品安全检测技术领域。

背景技术

伏马毒素(Fumonisins，FB)是一种镰刀菌毒素，主要由层生镰刀菌(F.proliferatum)和轮枝镰刀菌(F.verticillioides)等产生，它最早是由南非科学家Gelderblom等人于1992年从玉米中分离获得。伏马毒素是一类有不同的多氢醇和丙三羧酸组成的双酯类化合物，有11种不同的种类，但主要以FB₁、FB₂、 FB₃三种形式存在，其中FB₁危害最大、分布最广。伏马毒素会污染多种粮食作物，在世界各地的谷物及农副产品中广泛存在，尤其是玉米。2007-2010年巴西的100份玉米食品中检测到FB₁的浓度为0.126mg/kg～4.348mg/kg，检出率达 82％(Food Control,2012,26,614-618)；2010年土耳其抽检的100份玉米样品中，FB₁浓度从0.05mg/kg～25.72mg/kg检出率达52％(Food additivescontaminants.Part A, Chemistry,analysis,control,exposurerisk assessment,2012,29,799-808)；李丰华等(Food additivescontaminants.Part B,Surveillance,2015,8,169-174)对2014年山东省522份谷物样品进行检测，发现玉米中FB₁检测率为98.1％，平均值为369.2ug/kg。程传民等(饲料博览,2016(3):25-29)2014年对我国19个省615份饲料样品进行了检测，在华南地区的仔猪饲料中FB₁污染率高达94.1％，这些调查数据说明我国食品及饲料中FB₁污染现状不容乐观。

FB₁具有很好的稳定性，食品在储藏、加工、烹调高温条件下都不会发生降解，所以FB₁可以通过食物进入体内，危害人和动物的健康。FB₁的结构与人或动物的神经鞘氨醇极为相似，通过竞争鞘脂类代谢过程中的关键酶，致使神经鞘脂类生物合成受到抑制。神经鞘脂类代谢的阻断可增强细胞凋亡、影响细胞生长和分化，最终造成细胞的损伤。伏马毒素对很多动物的肝脏和肾脏具有损伤效应，因此具有很大的毒性。FB₁会导致马的脑白质软化症(ELEM)，该病对于马属动物有极高的致死率；FB₁也会导致猪的肺水肿和胸腔积水，同时会对猪的肝脏和胰脏造成损伤；FB₁还与人类食道癌高发率有关，在我国河北和河南部分地区，玉米中伏马毒素污染引发了当地人食管癌高发；山东省某地区原发性肝癌发病率的增加也与FB₁污染有关。目前，世界卫生组织国际癌症研究中心通过评估其对人类的危害后，把FB₁列为可能致癌物。

鉴于伏马毒素B₁污染的普遍性和危害性，它的污染风险评估、毒素研究以及控制研究等受到大家的广泛关注。但是无论是伏马毒素B₁的检测、抗体制备、毒理分析还是降解控制研究等，都需要大量的毒素标准品。然而现有的伏马毒素标准品的制备效率不高，技术不强，商品化的伏马毒素标准品主要由国外进口，价格非常昂贵。