[发明专利]一种免疫增强型重组PRRSV病毒样颗粒亚单位疫苗

说明书

本发明公开了一种免疫增强型重组PRRSV病毒样颗粒亚单位疫苗，由PRRSV病毒样颗粒和复合免疫佐剂组成。本发明通过基因工程的手段，改造了PRRSV GP5‑M基因，通过构建杆状病毒表达载体制备得到具有高免疫原性的PRRSV病毒样颗粒。另外，本发明通过免疫佐剂的改进，得到了一种免疫增强型重组PRRSV病毒样颗粒亚单位疫苗，该亚单位疫苗具有更好的免疫效果。

技术领域

本发明属于兽用生物技术领域，具体涉及一种免疫增强型重组PRRSV病毒样颗粒亚单位疫苗。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS) 是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus，PRRSV)引起的一种高度传染性疾病，因其临床上常常造成耳部发绀，又称蓝耳病，，主要引起母猪早产、流产、产死胎或木乃伊胎，仔猪和育成猪出现呼吸道疾病，发病率与死亡率高。该病最初于20世纪80年代在美国被首先报道，1996年起在我国发现首例临床病毒分离报道，2005年底出现高致病性PRRSV的大面积爆发。PRRSV是呈单股正链的RNA 病毒，属于动脉炎病毒科，根据抗原性和基因序列的不同，将全球的PRRSV 分为以 VR-2332 为代表的美洲型(North American，NA)和以Lelystad virus (LV)为代表的欧洲型(European，EU)。我国流行的PRRSV 主要是经典美洲株和变异型美洲株，但近几年欧洲株也屡有发现。此外，PRRSV 变异性和重组能力强，不时有新分支出现，比如最近报道的NADC30-Like亚型与GM2亚型呈现流行趋势逐渐上升的态势。PRRS 对全球养猪业都是巨大的威胁，2005年PRRS对美国生猪养殖造成的经济损失是5.6亿美元，其中母猪繁殖阶段损失6700万美元，断奶仔猪是2.01亿美元，而生长育肥猪损失最多，达到了2.92亿美元。2013年，Holtkampra估算PRRS对美国生猪养殖造成的经济损失达到了6.63亿美元，这比2005年高出了10%。欧洲2012年的数据显示PRRS导致的经济损失是126欧元/头，，这比2005年美国的数据(121美元/头)还要高。

PRRSV是单股正链、不分节段、有囊膜的RNA 病毒，病毒粒子大小约为50-70 纳米（nanometer，nm），基因组全长为14.9-15.5 kb，含有至少10 个开放阅读框（open readingframe，ORF）。ORF1a 区域编码非结构蛋白（non-structural protein， NSP）NSP1α/β 至NSP8，ORF1b 区域则编码NSP9至NSP12； ORF2a、ORF2b 和ORFs3-7，编码与病毒粒子结合的结构蛋白（Structural protein，SP）GP2、E、GP3、GP4、ORF5a、GP5、M与N，它们是由巢式3’共末端的一系列亚基因组mRNAs 翻译而来的；在10个ORFs两侧分别是5’端非编码区和3’端非编码区。PRRSV的结构蛋白包含GP5-M二聚体蛋白、GP2-GP3-GP4复合体蛋白和具有疏水性的E蛋白与ORF5a蛋白，它们与病毒的侵入及出芽密切相关。GP5蛋白（含大约200个氨基酸）是PRRSV中具有高变异特性的结构蛋白，其与M蛋白（含大约175个氨基酸）通过二硫键结合形成的GP5-M二聚体蛋白可与宿主细胞的唾液酸粘附素受体结合而使病毒吸附到宿主细胞表面，而病毒的内化步骤也与GP5密切相关，最近研究发现宿主细胞中如果存在大量表达的GP5蛋白时，可介导产生β干扰素以抑制PRRSV的增殖；已有研究报道GP5与M可形成病毒样颗粒，病毒样颗粒(virus-like particles， VLPs)是某种病毒的一个或多个结构蛋白装配成的空心颗粒，它既有类似天然病毒的稳定性和免疫原性，又具备携带外源蛋白或多肽的潜能，不含有病毒的核酸，没有感染性，使其 有望成为构建多价疫苗的良好载体。