[发明专利]一种可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条及制备方法

说明书

本发明涉及一种可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，所述的量子垫上包被有碳量子点标记的C反应蛋白抗体，所述的硝酸纤维素膜上自所述的样品垫所在侧向着所述的吸水纸所在侧依次设置有检测线和质控线，所述的检测线上包被有识别C反应蛋白单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗鼠IgG。本发明的试纸条结构简单，能够快速、准确、精准的对末梢血CRP进行定量检测，该试纸条的检测灵敏度高、稳定性强、特异性好，检测时间不大于15min，能够大大提高诊断效率以及检验操作人员的工作效率。

技术领域

本发明属于医学免疫学中量子点免疫荧光层析技术领域，具体涉及一种可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条及制备方法。

背景技术

CRP(C反应蛋白)是第一个被发现的机体急性期反应蛋白，普遍认为是一种非常敏感的炎症和组织损伤标记物，Tillett和Francis于1930年首先发现，肺炎患者血清中一种与肺炎球菌(现称肺炎链球菌)非型特异的菌体多糖成C多糖发生沉淀反应的物质。1941年Macleod和Avery先后证实这是一种急性感染时出现的蛋白质，与C多糖体的絮状沉淀反应依赖于Ca²⁺的存在。1944年，Joncs将其作为临床风湿热诊断标准的次要指标之一。之后研究人员发现，不仅在链球菌肺炎患者，亦可在其他各种急性期感染、炎症性疾病、坏死、外伤和恶性肿瘤患者都有类似的反应，其本质是机体对炎症状态的化学反应。CRP由肝细胞合成，CRP分子由5个相似的非糖基化多肽亚单位组成，每个亚单位包含206个氨基酸残基，其原体为以非共价键相连的环状结构，以5个为基数形成循环对称结构。其产生机理是：当机体受感染或组织受损伤时巨噬细胞和其他白细胞等被激活，产生白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子TNF-a等细胞因子及其他介导物，这些细胞因子和介导物到达肝脏，刺激肝细胞和上皮细胞合成CRP。疾病发生时，如风湿性关节炎或脓毒血症，CRP常于发病6-8h内开始升高，约48h达峰浓度300mg/L。基础研究表明，CRP浓度在一定范围内保持稳定，基线CRP浓度无显著的时间和季节等周期性变化。健康个体24h内无显著差异，饮食改变亦无明显影响，美国公共卫生署(PUS)的数据显示无论在吸烟者还是不吸烟者中，CRP的浓度和将来发生冠状动脉疾病都存在阳性联系。这项研究表明CRP浓度四分位数最高的个体将来发生中风可能性是正常人的2倍，将来发生心肌梗死和外周血管疾病可能性是正常人的3倍。故任何时间测定的CRP均有较大的临床参考价值。

目前，检测CRP的常用方法有：ELISA法、胶体金法、免疫荧光层析法、电化学发光法，但是这些检测方法，耗时较长，所采用的血样本均为静脉血。对于婴儿、大面积烧伤以及某些经常需要采血监测CRP水平的成人患者和儿童等患者或者而言，不宜反复抽取静脉血，末梢血采取方便、快捷，对人体造成的创伤小，是较好的血样本来源。

末梢血与静脉血在成分与采血方式和采血位点上是有较大区别的，例如RBC、Hb、HCT、MCHC(红细胞平均血红蛋白浓度)检测中末梢血明显低于静脉血。除此之外，末梢血的采血量一般比较少，抽血量与检验项目多少有关，静脉血的抽血量一般为几毫升，末梢血多在0.1～0.5mL左右，比较难以满足试纸条检测所需的最小样本量。此外在三甲医院的门诊、妇幼保健院的检验科，每天末梢血的样本很多并且集中，按照目前的操作速度，导致患者等待时间过长，也影响医院的日检测量。因此，虽然目前有一些CRP检测试剂盒测定静脉血中CRP的含量，但是这些试纸条不能快速、准确检测出末梢血中CRP的含量。