[发明专利]一种鉴定脑梗死生物标记物的方法及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种鉴定脑梗死的生物标记物的方法及其检测试剂盒。所述生物标记物为血清中经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(1‑Phenyl‑3‑methyl‑5‑pyrazolone，PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。本发明检测方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血便可区分正常人和脑梗死患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速定量脑梗死患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖，对于研究血清游离甘露糖及葡萄糖与脑梗死之间的关系、寻找新型脑梗死临床检测标志物有着非常重要的意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鉴定脑梗死的生物标记物的方法及其检测试剂盒。

背景技术

脑梗死也被称为缺血性脑卒中，是严重危害国人健康的一种脑血管疾病。《中国脑卒中防治报告2016》指出，我国现有1300万脑卒中患者，每年因脑卒中死亡的人数达188万。相比30年前，我国的脑卒中整体死亡率有所降低，但是脑梗死的死亡率却增高了28.8％；脑卒中的整体患病率从1993年的0.4％快速上升到2013年的1.23％，这其中脑梗死的患病人数约占整体的77.8％，并且呈现出低龄化的趋势。数据显示，约70％-80％的脑梗死患者经过急性期救治后出现机体神经功能受损，继而引发功能性障碍：运动功能障碍、感觉功能障碍、认知障碍、情绪障碍、言语和语言障碍、吞咽障碍、排泄障碍及心肺功能障碍等，导致患者终身残疾。2014年，全国脑梗死病例所产生的直接住院总费用高达470.35亿元，人均次医药费用为8841.4元，造成了沉重的社会和家庭经济负担。

及时的诊断和介入治疗是提高脑梗死患者生存率和规避系统性功能障碍的最佳方式。在有效的时间内(3～6h)回复血流灌注，挽救缺血半暗带是治疗脑梗死的重点，这就需要我们对脑梗死患者做出快速准确的诊断。目前对于脑梗死的诊断主要依靠影像学检查，头颅CT可以近乎100％的显示颅内出血，可用于鉴别缺血性和出血性脑血管病，但梗死发生的早期(＜24h)，约有50％～60％的CT结果正常。MRI是近年来逐渐普及的检测技术，能够灵敏地反映脑部的血肿变化，但是也存在使用上的局限性：1、难以显示钙化部位；2、对体内存在金属植入物的患者无法适用。因此，发展新型的脑梗死诊断方法，采取多学科联合的诊疗模式是提升医疗资源利用率，大幅度地提高临床诊疗质量的必由之路。

人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范围为3.90～6.16mmol/L。目前，医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度，暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20～80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1％。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明，细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘露糖的稳定。D-甘露糖是糖蛋白，细胞表面糖缀合物和糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白等结构中必需的单糖。其中，甘露糖是各种多糖复合物中N-糖链的重要组分，N-聚糖中的甘露糖残基来源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游离甘露糖是正常的血浆成分。目前，血清甘露糖的测定方法主要有酶法、气液色谱法、高分辨液相层析、气液色谱-质谱法和毛细管电泳法等。但这些方法均存在一定的不足之处。比如，使用酶法、气液色谱法和高分辨液相层析时，为避免高浓度的葡萄糖的影响需要将其去除，致使前处理过程比较繁琐；气液色谱-质谱法仪器价格昂贵，不适合常规目的；所需血清样本量大。目前没有文献报道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法同时检测脑梗死患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖。

发明内容

本发明的目的是提供了用于鉴定脑梗死的生物标记物及其应用，本发明采用柱前PMP衍生的高效液相色谱法(HPLC)检测脑梗死患者血清中的单糖，尤其涉及血清中游离甘露糖和葡萄糖的检测。本发明的技术方案可以用于检测脑梗死患者或正常人血清游离甘露糖和葡萄糖浓度，可以用于鉴定脑梗死患者。

为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案予以实现：