[发明专利]一种鉴定脑出血生物标记物的方法及其检测试剂盒

权利要求书

1.用于鉴定脑出血的生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血清经过柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的用于鉴定脑出血的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法，包括以下具体步骤：

(1)调节pH为7-14：取待检测的血清样品加超纯水于1.5mL离心管中，加入氢氧化钠，涡旋混匀；

(2)PMP衍生：每个样品加入PMP，涡旋混匀，离心后置于烘箱反应；

(3)加酸中和反应：将烘箱内的样品取出，放置冷却，每个样品加入盐酸，涡旋混匀；

(4)萃取：每管加入有机溶剂，涡旋，离心，移除下层有机溶剂，保留上清；

(5)将样品离心，取上清液于装有内插管的棕色上样瓶中，盖紧盖子，离心，待用于高效液相分析；

(6)制备甘露糖和葡萄糖的标准曲线；

(7)将步骤(5)得到的色谱图与步骤(6)的标准曲线比对并分析计算，确定甘露糖、葡萄糖的浓度以及葡萄糖与甘露糖浓度的比值。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定脑出血的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱为Agilent 1260高效液相系统，Agilent Poroshell EC-C18色谱柱(4.6mm×100mm，2.7μm)，所述步骤(5)中的色谱条件为：

检测波长：254nm，带宽4nm；

参比波长：350nm，带宽100nm；

柱温：37℃；

流速：1mL/min；

进样体积：20μL；

流动相：A相为乙腈，B相为pH为5.5的0.1mol/L乙酸铵-乙酸缓冲溶液。

4.根据权利要求3所述的用于鉴定脑出血的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述步骤(5)中流动相的梯度变化为：

0min，A相15％，B相85％；

10min，A相22％，B相78％；

15min，A相24％，B相76％；

15.1min，A相15％，B相85％；

20min，A相15％，B相85％。

5.根据权利要求2所述的用于鉴定脑出血的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述步骤(3)中盐酸的浓度为0.3mol/L。

6.根据权利要求2所述的用于鉴定脑出血的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述步骤(4)中有机溶剂为三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和正己烷中的至少一种。

7.权利要求2-6所述的鉴定脑出血的生物标记物的定量分析方法在脑出血疾病中的应用，其特征在于所述血清样品为脑出血患者的血清。

8.一种鉴定脑出血的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求1所述的生物标记物，即血清经过柱前PMP衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。

9.根据权利要求8所述的鉴定脑出血的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括浓度为78.00μrnol/L甘露糖和浓度为5621μmol/L的葡萄糖的标准液。

10.权利要求2-9任一项所述的试剂耗材在制备用于脑出血患者血清中甘露糖和葡萄糖定量的试剂盒中的用途。

11.一种鉴定脑出血的试剂盒，其特征在于通过血清中的甘露糖和葡萄糖定量鉴定脑出血。

12.权利要求8-11任一项所述的鉴定脑出血的试剂盒在体外检测脑出血的用途。

13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于通过血清中的甘露糖和葡萄糖定量鉴定脑出血。