[发明专利]一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体及其制备方法在审
| 申请号： | 201811324006.9 | 申请日： | 2018-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN109517066A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 邓兴朝;王锐;陈欢;林金昌;王翠翠 | 申请（专利权）人： | 深圳容金科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/26 | 分类号： | C07K16/26 |
| 代理公司： | 深圳市徽正知识产权代理有限公司 44405 | 代理人： | 李想 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市宝*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 制备 糖化蛋白 小鼠腹腔 偶联 特异性单克隆抗体 抗原特异性 特异性杂交 细胞系表达 诊断 避孕疫苗 次亚克隆 分离血清 扩大培养 瘤细胞株 取脾细胞 先兆流产 骨髓瘤 免疫原 细胞株 腹水 提纯 采血 单抗 小鼠 效价 分泌 肿瘤 筛选 融合 检测 预测 生产 | ||
1.一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备免疫原：以CHOK1细胞系表达的偶联CTP的高糖化蛋白为免疫原；
免疫：采用长程免疫方法，将纯化的偶联CTP的高糖化蛋白分4次注入小鼠腹腔，每次时间间隔为3周；
筛选：在4次免疫后采血，分离血清，检测抗体效价；
细胞融合及克隆化：选免疫效价超过1：10000的小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，经过三次亚克隆筛选获得稳定分泌抗hCGβ-CTP单抗的特异性杂交瘤细胞株；
腹水制备：将扩大培养的细胞株注入小鼠腹腔以生产大量腹水，经提取纯化获得hCGβ-CTP单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，制备免疫原包括步骤：
获得编码偶联CTP的高糖化蛋白基因；
构建pMH3-EPO-CTP真核表达载体；
以CHOK1细胞系表达偶联CTP的高糖化蛋白。
3.根据权利要求1所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述长程免疫方法包括：
将纯化的偶联CTP的高糖化蛋白与弗氏完全佐剂充分混匀成乳状，小鼠腹腔注射进行首次免疫，3周后，采用免疫原与弗氏不完全佐剂充分混匀后小鼠腹腔注射，再进行3次免疫，每次时间间隔为3周。
4.根据权利要求3所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，首次免疫中，纯化的偶联CTP的高糖化蛋白与弗氏完全佐剂混合比例为1:1；后面3次免疫中，免疫原与弗氏不完全佐剂混合比例为1:1。
5.根据权利要求4所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，4次免疫注射中，注射剂量为100ug/只。
6.根据权利要求1所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，采用酶联免疫吸附法检测抗体效价。
7.根据权利要求1所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，扩大培养的细胞株注入8-10周龄Balb/c小鼠腹腔。
8.根据权利要求7所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，腹水制备中，每只8-10周龄Balb/c小鼠腹腔细胞接种量为106个。
9.一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体，其特征在于，采用如权利要求1-7任一项所述的方法制备得到。
10.根据权利要求9所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述抗hCGβ-CTP单克隆抗体特异性结合人尿中的绒毛膜促性腺激素β亚基，或者特异性结合重组人绒毛膜促性腺激素β亚单位羧基末端肽。
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