[发明专利]乙二胺四乙酸二钠作为治疗水母皮炎药物的应用

说明书

本发明涉及海洋生物技术领域，具体涉及一种乙二胺四乙酸二钠(非特异性金属蛋白酶抑制剂)作为治疗水母皮炎药物的应用。EDTA二钠作为治疗水母皮炎药物的应用。本发明采用乙二胺四乙酸二钠可有效抑制水母毒素引起的两种细胞(人角质形成细胞HaCaT和人胚胎成纤维细胞CCC‑ESF‑1)的死亡和炎症因子mRNA的表达量，进而可将其作为用于制备水母皮炎的药物，拓宽了EDTA二钠的应用范围。

技术领域：

本发明涉及海洋生物技术领域，具体涉及一种乙二胺四乙酸二钠(非特异性金属蛋白酶抑制剂)作为治疗水母皮炎药物的应用。

背景技术：

水母属腔肠动物门，有刺胞的海洋水生动物，当人触及水母时，刺胞内的毒素以极快的速度刺入皮肤导致蜇伤。我国主要的伤人水母有沙海蜇和霞水母。近年来，全球范围的水母暴发不仅造成海洋生态系统紊乱，也给人类生产、生活带来了严重的影响。水母蜇伤已经成为最常见的海洋生物伤。据美国国立卫生院估计，全球每年约有1.5亿人次被水母蜇伤，其中不乏死亡病例。水母蜇伤引起的红肿红斑、水泡以及刺痒、麻痛感等水母皮炎症状是主要症状，影响日常工作与生活，特别是睡眠。目前，国内外没有专治水母皮炎的药物，大多沿用民间土法、验方或参考其它种类的皮炎来治疗，效果差，甚至于加重病情。

水母毒素是水母蜇伤的物质基础，是发病的根本原因。水母毒素的主要活性成分为多肽和蛋白，具有溶血、酶活性、心脏毒性、神经毒性、肌肉毒性、皮肤坏死作用等多种生物活性。转录组联合蛋白组学对水母毒素成分解析发现，金属蛋白酶是水母毒素的主要成分，传统生化分析也验证了水母毒素具有金属蛋白酶活性。蛇毒中的金属蛋白酶成分在其咬伤导致的伤口疼痛、流血不止以及溃烂等中毒现象中起重要作用。因此，水母毒素中的金属蛋白酶可能是导致水母皮炎的重要因素。所以,亟需根据水母毒素的生物活性研制治疗水母皮炎的药物。

发明内容：

本发明的目的是提供一种EDTA二钠(非特异性金属蛋白酶抑制剂)作为制备水母皮炎药物的应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为

一种EDTA二钠作为制备水母皮炎药物的应用。

所述式Ⅰ所示EDTA二钠经溶解稀释后作为制备水母皮炎药物的应用；

所述式Ⅰ所示EDTA二钠经灭菌水溶解后，再用10mM磷酸盐缓冲液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄，pH 7.4)稀释。

EDTA二钠抑制水母毒素对人角质形成细胞HaCaT和人胚胎成纤维细胞CCC-ESF-1死亡率的实验方法为：

将EDTA二钠用灭菌水溶解后，再用10mM磷酸盐缓冲液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄，pH 7.4))稀释得到EDTA二钠溶液。

然后向水母毒素中加入EDTA二钠溶液混合，使混合液中EDTA二钠与水母毒素(以蛋白计)的质量比等于或小于1.49:1，混匀，37℃下反应30min后待用。

向铺有1×10⁵个/mL细胞(细胞可为HaCaT或CCC-ESF-1)的96孔板中加入100μL的EDTA二钠和水母毒素混合液，100μL的按体积比为1:1混合的水母毒素与细胞培养基混合液(对照)及100μL的细胞培养基(空白)，用MTT法测定细胞的存活率。

EDTA二钠抑制水母毒素导致的人角质形成细胞HaCaT和人胚胎成纤维细胞CCC-ESF-1炎症因子mRNA表达量的实验方法为：